桉树根系共生真菌的分离与鉴定

桉树根系共生真菌的分离与鉴定王思佳;赖文珍;谢贤安;陈辉;唐明;胡文涛【摘 要】南方土壤缺磷现象较为严重,菌根真菌等共生真菌对植物吸收磷等养分具 有重要的促进作用•该研究采集尾叶桉(Eucalyptus urophylla)、窿缘桉(Eucalyptus exserta)和尾巨桉(E.urophyllaxE.grandis)3 种华南地区主要造林树 种根系，采用组织分离法进行真菌分离，通过形态特征和核糖体18S rDNA基因ITS 序列分析进行鉴定,经柯赫氏法则(Koch's Rule)确定桉树根系共生真菌，为桉树共生 真菌理论研究和资源利用提供依据.结果表明:(1)3种桉树根系中,窿缘桉具有外生菌 根(ectomycorrhizas,ECM)和丛枝菌根(arbuscular mycorrhizas,AM)结构,尾叶桉 和尾巨桉同时具有AM结构、ECM结构和深色有隔内生真菌(dark septate endophytes fungi,DSE)结构.(2)3种桉树根系中分离鉴定出6种真菌:三色小皮伞 菌(Marasmius tricolor)、黑柄裸脚伞(Gymnopus melano-pus)、茎点霉属 (Phoma sp.)、镰刀霉属(Fusarium sp.)、二型伞霉(Umbelopsis dimorpha)和芒 弗里亚拟盘多毛抱(Pestalotiopsis mangifolia).(3)6种真菌回接巨桉(Eucalyptus grandis)组培苗，三色小皮伞菌和黑柄裸脚伞形成ECM结构，为ECM真菌;茎点霉 属、镰刀霉属、二型伞霉和芒弗里亚拟盘多毛抱形成DSE典型的深色有隔菌丝和 微菌核结构,推测为DSE;其中2种ECM真菌为桉树中首次报道.【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2018(038)008【总页数】9页(P1553-1561)关键词】 桉树;外生菌根真菌;共生真菌;深色有隔内生真菌作 者】王思佳;赖文珍;谢贤安;陈辉;唐明;胡文涛 【作者单位】华南农业大学 广东省森林植物种质创新与利用重点实验室,林学与风 景园林学院,广州 510642;华南农业大学 广东省森林植物种质创新与利用重点实验 室,林学与风景园林学院,广州 510642;华南农业大学 广东省森林植物种质创新与利 用重点实验室,林学与风景园林学院,广州 510642;华南农业大学 广东省森林植物种 质创新与利用重点实验室,林学与风景园林学院,广州 510642;华南农业大学 广东省 森林植物种质创新与利用重点实验室,林学与风景园林学院,广州 510642;华南农业 大学 广东省森林植物种质创新与利用重点实验室,林学与风景园林学院,广州 510642【正文语种】中文【中图分类】Q93-331;Q948.122.3桉树是桃金娘科(Myrtaceae)桉属(Eucalyptus)植物的统称，属常绿高大乔木，具 有生长速度快、树干通直、适应性强等特点，是中国南方主要的造林树种［1］。

南 方酸性红壤和砖红壤中磷成分主要为磷酸铝、磷酸铁和磷酸钙，有效磷含量低，引 起桉树生长缓慢，某些组织发生畸变等现象［2］为此，大多桉树栽培区通过施用 化肥来提高桉树生长量，而化肥又会导致土壤理化性质不断加剧恶化，土壤质量下 降加之南方土壤呈酸性，磷肥很难被植物吸收，最终导致桉树缺磷现象严重，长 期使用化学肥料，不仅会对周围环境造成污染，还会导致土壤肥力退化［1］菌根(mycorrhiza )是土壤中某些真菌与植物根系形成的共生体，具有促进植物吸收 水分和磷素等矿质营养，提高植物生长量，增强植物抗逆能力和改良森林土壤结构 特性等重要作用［3-5］外生菌根(ectomycorrhizas，ECM)和丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza , AM)是林木菌根的主要类型⑸深色有隔内生真菌 (dark septate endophytic fungi，DSE)广泛存在于植物根围，是一类能够定殖在 植物根系的真菌类群，被认为是“特殊的菌根菌”［6］，并且能够与菌根真菌共同 存在于植物根系中［7-8］桉树是既可以形成AM，又可以形成ECM的树种［9］AM真菌可以在一定程度上 提高桉树对磷的高效利用，并且能够缓解桉树受到土壤中铝离子的毒害⑸。

ECM 真菌对桉树青枯病的生物防治有重要意义［10］朱天辉等［11］对四川省范围内的巨 桉(Eucalyptus grandis)、尾叶桉(Eucalyptus urophylla)、蓝桉(Eucalyptus globulus)、大叶桉(Eucalyptus robusta)ECM 真菌调查，发现 9 科 11 属 17 种 ECM真菌，梁洪萍［12］在四川省内的巨桉发现7科、10属、17种ECM真菌，但 这些ECM真菌多为野外调查发现，与桉树的共生效应研究很少为发掘优良的桉 树共生真菌资源，本研究通过对桉树根系真菌侵染率的测定和真菌的分离鉴定，将 真菌回接桉树，经柯赫氏法则(Koch's Rule)确定桉树共生真菌，为进一步研究共 生真菌促进桉树生长、增加磷素营养吸收的机制，以及应用共生真菌提高桉树造林 成活率、生物量和木材产量提供科学依据1 材料和方法1.1 样品采集尾叶桉、窿缘桉(Eucalyptus exserta)和尾巨桉(E. urophylla x E. grandis)采自华 南农业大学树木园和增城教学科研基地，位于N23°09'10"~23°14'22", E113°20'22"~113°37'56",属于亚热带季风气候和亚热带海洋性气候，土壤为赤 红壤。

2017年11月采集样品，在树冠的投影区内取30-40 cm范围内土层的树 木侧根作为根样，将根上的大块泥土轻轻抖掉，其余泥土连同根系一起装入密封袋 中，同种桉树放入同一密封袋中，封口标记根样带回实验室后，一部分用于立即 观察根系的形态结构和共生真菌的分离，另一部分用于侵染率的测定1.2 试验方法1.2.1 共生真菌的侵染率统计将采集的根样冲洗干净，采用透明压片法对根系进行 透明、酸化、台盼蓝染色和脱色后，在显微镜下统计菌根侵染情况［13］，参照 Trouvelot等［14］的方法统计AM真菌和ECM真菌的侵染率及侵染强度1.2.2共生真菌的分离培养采用组织分离法分离真菌将根系洗去泥土，剪成1~2 cm根段，在体式显微镜下找出带有共生真菌结构的根尖，经3%次氯酸钠表面 消毒2~3 min，无菌水中冲洗后，剪成0.5 ~ 1 cm的根段，置入PDA培养基内， 25 °C恒温倒置培养⑸待培养基内长出菌丝后进行纯化，经过纯化后的菌株一部分进行插片培养［15］，待 菌丝长到玻片中部，用于真菌的形态学鉴定另一部分纯化菌株接种到 PDA 斜面， 4 C冰箱保存，用于分子鉴定1.2.3 真菌的形态学鉴定 观察菌落的表面特征、形状、颜色、大小、光滑度等菌落 特征，记录其生长状况。

显微镜下观察菌丝的颜色、是否分隔、分枝情况；观察分 生孢子的形状、颜色、大小、细胞壁特征、有无子囊（担子）及子囊孢子（担孢子）等 特征根据真菌分类文献，并参阅近几年有关真菌鉴定的文献对分离菌株进行形态 学鉴定［16-18］1.2.4真菌的分子生物学鉴定将纯化的真菌在25 C培养2周后，收集新鲜菌丝进 行ITS序列分析参照Zhou等［19］研究方法，采用真菌DNA微量提取试剂盒 （Omega公司，D3195-01）提取DNAITS序列扩增引物选择真菌ITS区通用引 物 ITS1-F 和 ITS4（ITS1-F: CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA ; ITS4: TCCTCCGCTTATTGATATGC）［20］，由生工生物技术有限公司合成通过PCR反应扩增真菌ITS rDNA基因反应体系20 pL［1O pL PremixTap（Sangon Biotech）、0.5 pL ITS4、0.5 pL IFS1-F、1 pL PCR 产物和 8 pL ddH2O］反应条件为95 C预变性3 min ;94 C变性30 s,55 C退火25 s ,72 °C延伸1 min , 35个循环；最终72 °C延伸5 min。

PCR产物进行1%琼脂糖 凝胶电泳（100 V，40 min），采用胶回收试剂盒（OMEGA公司，D2500）进行PCR 产物回收回收产物采用TaKaRa公司pMD18-T试剂盒进行T/A连接并克隆转 化连接反应体系 5 pL（2 pL pMD18-T、0.5 pL Insert DNA 和 2.5 pL Solution 1）,37 C培养过夜，送北京擎科新业生物技术有限公司进行双向测序将真菌测序所得的ITS序列在NCBI中运用BLAST工具进行比对分析，并从NCBI 中下载已知同源序列，用软件MEGA（Version 5.1）进行比对，用Neighbor- Joining 法构建系统发育树使用Maximum Composite Likelihood方法计算 Bootstrap值，估测系统发育树的置信度I. 2.5共生真菌的回接将沙子、蛭石（体积比为1:1）在121 C灭菌60 min，装满 体积为0.3 L的花盆中，参考刘茂军等［21啲方法并做适当修改，将分离出的共生 真菌回接到巨桉组培苗（来自中国林业科学研究院热带林业研究所），每株接种20 个直径5 mm的菌饼，每组3个重复将接种好的植株套袋，在组培室内培养（温 度25 C,湿度60%，光强5 000 Lux），半个月后取下套袋；定期浇水，2个月 后，收获接种苗，检测根系共生真菌的定殖情况并测定侵染率。

2 结果与分析2.1 共生真菌侵染率统计观察到尾叶桉、窿缘桉和尾巨桉均能被菌根真菌侵染，其中窿缘桉的AM真菌侵 染率最高，达到58.75%，侵染强度14.54% ;其次是尾巨桉，AM真菌侵染率为 51.33%，侵染强度15.74%；尾叶桉最低，侵染率为48.67%，侵染强度为II. 03%（表1）与AM真菌侵染率相比，ECM真菌的侵染率相对较低，尾叶桉、尾巨桉和窿缘桉3种桉树的ECM真菌侵染率依次为11.03%、13.02%和 15.00% , 侵染强度为1.64%、1.60%和0.81%（表1）经方差分析，尾叶桉、窿缘桉和尾巨 桉3种桉树AM真菌总侵染率差异不显著（P>0.05） , ECM真菌总侵染率差异也不 显著（P>0.05）对3种桉树共生真菌侵染特征观察，发现尾叶桉（图1,A~C）和尾巨桉（图1,D~ F）都同时具有AM真菌结构、ECM真菌结构和DSE结构，窿缘桉具有AM真菌 结构（图1, G）和ECM真菌结构（图1, H、I）3种桉树的AM真菌结构和ECM 真菌结构都比较明显，典型的深色有隔内生真菌结构在尾叶桉和尾巨桉都有观察到 尾叶桉、窿缘桉和尾巨桉3种桉树根尖均存在外生菌根的菌套结构（图2）。

但3种 桉树的外生菌根形态不同，其中尾巨桉为单轴分枝状（图2，A），窿缘桉为单轴分 枝和二叉分枝（图2, B、C），尾叶桉的菌根形态呈二叉分枝状（图2, D~F）外生 菌根的菌根形态特征是鉴定外生菌根真菌的依据之一,说明外界自然环境下,本研 究采样点的尾巨桉和尾叶桉分别与1种外生菌根真菌形成菌根,窿缘桉与2种外 生菌根真菌形成菌根表1桉树根系菌根真菌侵染状况Table 1 The colonization status of mycorrhizal fungi in Eucalyptus roots 宿主植物 Host speciesAM 真菌 AM fungiECM 真菌 ECM fungi 侵染率 Fungal colonization/%侵染强度 Colonization intensity/%侵染率 Fungal colonization/%侵染强度 Colonization intensity/%尾叶桉 Eucalyptus urophylla48.67±9.8711.03±4.4114.00±2.651.64±0.81 窿缘桉 Eucalyptus exserta58.75±13.1514.54±11.5215.00±0.000.81±0.67 尾巨桉 E. urophylla x E. grandis51.33±1.1515.74±4.5213.02±1.751.60±0.49A ~C.尾叶桉；D~F.尾巨桉；G ~ I•窿缘桉；a.菌套结构；b.深色有隔内生真菌； c.根内菌丝；d.丛枝结构；e.泡囊；f.根外菌丝图1桉树根系中的菌丝结构A-C. Eucalyptus urophylla；D-F. E. urophylla x E. grandis；G-I.Eucalyptus exserta; a. Mantle；b. Dark septate endophytes；c. Internal hyphae；d. Arbuscule；e. Vesicle；f. External hyphaeFig.1 Mycelium structure inEucalyptus roots图2桉树根系外生菌根真菌的形态结构Fig.2 Ectomycorrhizas in Eucalyptus roots2.2 桉树共生真菌的形态特征从3 种桉树根系共分离出 6 株共生真菌，标记为 WY1、WY3、WY9、LY1、WJ1WJ5。

在PDA培养基上培养20 d，形成的菌落颜色呈白色、淡黄色或者深灰色； 形状为圆形或椭圆形；菌丝致密或稀疏(图3);其中WY1生长速度最快，25工恒 温培养20 d菌落直径为9 cm，最快长满平板；其次为WY3、WJ5和LY1,菌落 直径分别为8.5 cm、8.6 cm和9 cm ; WY9和WJ1则生长比较缓慢，菌落直径 为5.4 cm和4.4 cm插片培养的盖玻片置于载玻片上，显微镜观察的菌丝形态 (图4) ，菌落特征和形态特征描述见表2从PDA培养基的菌落特征(图3)以及显微镜下的菌丝形态观察(图4)，可以看出 WJ5、WY3、WY9和LY1的菌落颜色呈深色，菌丝有隔，都具有典型的深色有隔 内生真菌的特征，初步推断为DSE而WY1和WJ1的菌落呈白色，菌丝无色， 推测属于担子菌亚门(Basidiomycotina)参照真菌形态和分类描述的特征，鉴定 出WY3为茎点霉属(Phoma sp.) , WY9为镰刀霉属(Fusarium sp.) , LY1为拟盘 多毛抱属(Pestalotiopsis) , WY1为小皮伞属(Marasmius sp.) , WJ1为裸脚伞属 (Gymnopus sp.) , WJ5 为伞状霉属(Umbelopsis sp.)。

A. WY1 ; B. WY3 ; C. WY9 ; D. WJ1 ; E. WJ5 ; F. LY1 图 3 分离菌株在 PDA 培 养基上生长 20 d 后的菌落形态 Fig.3 The isolated fungus colonies on PDA medium after 20 daysA. WY1 ; B. WY3 ;C~D. WJ5;E~G. LY1 ; H. WJ1 ; I. WY9 图 4 分离的真菌 的菌丝和抱子形态 Fig.4 The mycelium and spore morphology of isolated fungi2.3 共生真菌的分子鉴定提取根系共生真菌DNA后，利用引物ITS1-F和ITS4，对提取的DNA菌液进行 PCR扩增，在凝胶成像系统中看到清晰的条带(图5)将真菌测序所得的ITS序列 提交到GenBank数据库后，在线运用BLAST工具进行比对，结果显示：WY1和 WJ1与GenBank中的JN943601.1和MF100988.1菌株有95%以上的相似度， 结合形态特征确定它们为担子菌亚门中不同属的2种外生菌根真菌，分别为三色 小皮伞菌(M. tricolor)和黑柄裸脚伞(G. melanopus) ； WY3、WY9、WJ5 和 LY1 分别与GenBank中茎点霉属、镰刀霉属、二型伞霉(U. dimorpha)和芒弗里亚拟 盘多毛抱(P. mangifolia )有94%以上的相似度(表3)。

将真菌测序所得的 ITS 序列提交到 GenBank 数据库，运用 BLAST 工具进行比对， 并从NCBI下载GenBank数据库内已知同源序列，用软件MEGA(Version 5.1 )进 行对比分析，用Neighbor-Joining法构建系统发育树(图6)，可以看到，6 株真 菌(红色☆标出)分为3个类群，隶属于担子菌亚门、接合菌亚门(Zygomycotina) 和半知菌亚门(Deuteromycotina)其中担子菌亚门单独成一类群，包括WY1和 WJ1 ；接合菌亚门包括WJ5 ； WY3、WY9和LY1同属半知菌亚门，其中LY1和 WY9有极高的相似度表 2 真菌菌落特征和形态特征 Table 2 The characteristics of colonies and morphology 菌株编号 Strain No.菌落特征 Character of colonies 培养 20 d 后 菌落直径 20 days old colony of isolated fungi/cm 形态特征 Character of mycelium and sporeWYI菌落呈白色,绒毛状，生长速度快，菌落环纹不明显The colony was white and villous. It grew fast and the colony rings were not obvious9.0菌丝无色,无隔,直径约3 pm;抱子无色或近无色The mycelium was colorless and aseptate. The di-ameter was about 3 pm; The spores were nearly colorlessWY3菌落呈黄棕色，细绒状，生长速度较快,菌落环纹均匀The colony was yellow-brown and villous. It grew a little fast and the colony rings were uniform8.5菌丝通直，深色有隔，直径2~4 pm;抱子小，近球形The mycelium was straight with dark septa. The diameter was about 2-4 pm; The spores were small and nearly sphericalWY9 菌落呈淡黄棕色,绒毛状，生长 速度缓慢，菌落环纹不明显 The colony was yellow-brown and villous. It grew slowly and the colony rings were not obvious5.4 菌丝细长而直,深色有隔,分枝, 直径3~4 pm;分生抱子镰刀形或者梭形The mycelium was straight with dark septa and branches. The diameter was about 3-4 pm; The spores were sickle or spindleWJI菌落白色，细绒状,生长速度缓慢，菌落环纹不明显The colony was white and villous. It grew slowly and the colony rings were not obvious4.4 菌丝白色，直径 2~3 pm;未见抱子 The mycelium was white and the diameter was a-bout 2-3 pm; The spores were not foundWJ5 菌落土黄 褐色，菌丝致密，生长速度快，外围菌落环纹明显The colony was yellow-brown like soil with dense mycelium. It grew fast and the outer colony rings were obvious9.0菌丝深色有隔，直径3~4 pm;抱子圆球形、椭圆形或不规则The mycelium was dark and septate. The diame-ter was about 3-4 pm; The spores were spheri-cal, elliptical or irregularLYI 菌落呈深灰色，有粉状物，菌丝 致密,菌落环纹密集 The colony was dark gray with powder and dense mycelium. The colony rings were dense9.0 菌丝通直，深色有隔，直径 3~5 pm; 分生抱子纺锤形或圆球形，多抱The mycelium was straight with dark septa.The diameter was about 3-5 pm; The spores were spindle or spherical 表3桉树根系共生真菌rDNA ITS序列Blast比对结果Table 3 Blast results of symbiotic fungus rDNA ITS in Eucalyptus roots 菌株编号 Strain No.GenBank 相似菌株Nearest type strain相似菌株GenBank登录号Accession No.相似度 Identity/%WY1 三色小皮伞菌 Marasmius tricolor 三色小皮伞菌 Marasmius tricolorJN943601.1KX058070.19595WY3 茎点霉属 Phoma sp.茎点霉属 Phoma sp.KF367549.1GU183116.19895WY9 镰刀霉属 Fusarium sp.镰刀霉属 Fusarium sp.KU059845.1KM979804.19999WJ1 黑柄裸脚伞 Gymnopus melanopus 黑柄裸脚伞 Gymnopus melanopusMF100988.1NR 137539.19999WJ5 二型伞霉 Umbelopsis dimorpha 伞状霉属 Umbelopsis sp.LC206664.1JQ912671.19999LY1 芒弗里亚拟盘多毛抱 Pestalotiopsis mangifolia 拟盘多毛抱属 Pestalotiopsis sp.KU204660.1JQ905644.19496 图5分离真菌DNA的PCR产物1%琼脂凝胶电泳Fig.5 PCR products of isolated fungi on 1% agar gel electrophoresis 综合形态特征和ITS序列分析，确定6种真菌隶属3亚门5 目 6科6属。

其中， 半知菌亚门、瘤座抱菌目(Tuberculariales)、瘤座抱菌科(Tuberculariaceae)、镰 刀霉属，分离自尾叶桉；球壳抱目(Sphaeropsidales)、球壳抱科 (Sphaerioidaceae)、茎点霉属，分离自尾叶桉；黑盘抱菌目(Melanconiales)、 黑盘抱菌科(Melanconiaceae)、拟盘多毛抱属、芒弗里亚拟盘多毛抱，分离自窿 缘桉担子菌亚门、伞菌目(Agaricales)、小皮伞科(Marasmiaceae)、裸脚伞属、 黑柄裸脚伞，分离自尾巨桉；白蘑科(Tricholomataceae)，小皮伞属、三色小皮 伞菌，分离自尾叶桉接合菌亚门、毛霉目(Mucorales)、伞状霉科 (Mucoraceae)、伞状霉属、二型伞霉，分离自尾巨桉图6基于18S rDNA ITS序列构建的系统发育树Fig.6 Neighbor-joining phylogenetic tree based on 18S rDNA ITS sequencesA~B.三色小皮伞菌；C~D.芒弗里亚拟盘多毛抱；E~F.二型伞霉；G.镰刀霉属; H.黑柄裸脚伞；I.茎点霉属a.根外菌丝；b.深色有隔内生真菌；c.微菌核；d.根 内菌丝图7分离的真菌在回接根系上形成的菌丝结构A-B. M. tricolor ； C-D. P.mangifolia；E-F. U. dimorpha；G. Fusarium sp.；H. G. melanopus；I.Phoma sp.a. External hyphae；b. Dark septate endophytes；c. Microsclerotia；d. Internal hyphaeFig.7 Mycelium structures of isolated fungi formed in re-inoculated roots after 60 daysA~D•三色小皮伞菌；E、F.黑柄裸脚伞图8回接根系上的外生菌根形态A-D. M.tricolor; E-F. G. melanopusFig.8 Ectomycorrhizas formed in re-inoculated roots of Eucalyptus after 60 days2.4 真菌回接桉树的侵染效应2.4.1 真菌与桉树共生效应 6种真菌回接巨桉组培苗后菌丝侵染情况显示，茎点霉 属、镰刀霉属、二型伞霉和芒弗里亚拟盘多毛孢4种真菌形成深色有隔菌丝和微 菌核(microsclerotia)结构(图7)，推测它们为DSE，微菌核丰富度分别为46.8%、 42.3%、56.7%和62.3%。

三色小皮伞菌和黑柄裸脚伞2种真菌形成外生菌丝及 菌套结构，确定为桉树外生菌根真菌(图8)2.4.2回接后侵染率统计 6种真菌回接无菌巨桉组培苗，测定侵染率发现， 6种真 菌均能在巨桉根内侵染，其中茎点霉属的侵染率最高(52.2%)，其次为黑柄裸脚伞 (侵染率为45.3%) ，三色小皮伞菌、镰刀霉属、二型伞霉和芒弗里亚拟盘多毛孢的 侵染率分别为30%、 32.2%、 33.2%和22.1%3讨论桉树是典型的既可以形成丛枝菌根(AM)，又可以形成外生菌根(ECM)的树种［5］， 甚至外生菌根、丛枝菌根和两者混合菌根同时存在［22］，本研究在尾叶桉、窿缘桉 和尾巨桉3种桉树除了观察到有ECM结构和AM真菌结构，同时，在尾叶桉和尾 巨桉中还观察到典型的深色有隔内生真菌结构，说明桉树菌根真菌具有多样性，不 仅是前人报道的可以与AM真菌、ECM真菌形成混合菌根，还可以和DSE形成 共生体系本研究在桉树根系中首次报道2种ECM真菌，三色小皮伞菌和黑柄裸脚伞弓明 钦等［23］对华南地区桉树ECM真菌的调查发现11种，优势菌为多根硬皮马勃 (Scleroderma polyrhizum Pers);朱天辉等［11］和梁洪萍［12］分别发现四川桉树 有17种ECM真菌，都与本次分离到的2种ECM真菌不同，不同树种、不同生 态环境会影响菌根真菌的种类和多样性。

三色小皮伞菌具有产漆酶的特性，漆酶属 于木质素降解酶类，可参与植物细胞壁的形成，还可去木质素，在环境修复、农业 生产等领域用途广泛［24］;黑柄裸脚伞为中国新纪录种［25］，其生物学特性有待进 一步研究在桉树根系中分离得到4种内生真菌，回接后均观察到DSE典型的深色有隔菌丝 和微菌核结构，推测它们为桉树根系中的DSE，有待于进一步的研究茎点霉属、 拟盘多毛孢属和镰刀霉属是桉树中具有一定抗菌作用的内生真菌［26］，谢玲等［27］ 在甘蔗(Saccharum officinarum )根围发现深色有隔内生真菌茎点霉属，韦继光 ［28 ］从南山茶(Camellia semiserrata)和短叶罗汉松(Podocarpus macorphyllus) 中分离出芒弗里亚拟盘多毛孢;格希格图等［29］在桉树根系中发现镰刀菌 (Fusarium)的存在，徐超等［30］发现二型伞霉可提高铁皮石斛生长速度和增强抗旱 能力参考文献:【相关文献】[1]任忠秀，包雪梅,于家伊，等•中国桉树人工林施肥现状、存在问题及对策J]•桉树科技,2013, 30(4): 52-59.REN Z X, BAO X M, YU J Y, et al. Current status, problems and countermeasures of Eucalyptus plantation fertilization practices in China[J]. Eucalypt Science and Technology, 2013, 30(4): 52-59.[2] 苏英吾，李向阳.华南土壤肥力特征与桉树施肥[J].中南林业调查规划，1997,(3): 35-38.SU Y W, LI X Y. Characteristics of soil fertility in south China and fertilization of Eucalyptus[J]. Central South Forest Inventory Planning, 1997,(3): 35-38.[3] 张文泉，闫伟.夕卜生菌根菌对樟子松苗木生长的影响[J].西北植物学报,2013, 33(5): 998-1 003.ZHANG W Q, YAN W. 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