总抗氧化能力测定FRAP法一类严选

小麦叶片总抗氧化能力测定（FRAP法）一、 实验原理FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tri-pyridyl-tria-zine(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应 AntioxidantFe3+-TPTZ（橘黄色）——————> Fe2+-TPTZ (蓝色)二、 实验步骤1. FRAP工作液配制：0.3 M pH 3.6 醋酸缓冲液：0.364g无水醋酸钠+3.2mL冰乙酸定容至200mL，用1M HCl调节pH至3.6；10mmol/L TPTZ溶液25mL：0.078g TPTZ用40mM 盐酸溶液定容至25mL；20mmol/L FeCl3溶液50mL：2.78g用RO水定容至50mL；上述溶液以10:1:1的比例混合（现配现用）。

2. 取叶片0.1g，加入2.5mL蒸馏水研磨稍沉淀后取1.5mL 12000g离心10min（4oC），取上清液3. 在反应管中加入100uL上清液，再加入2.4mL工作液，37 oC条件下水浴10min，于593nm处测定吸光度，4. 标准曲线绘制：以0.1-1.6mmol/L的FeSO4的标准液替代样品绘制标准曲线三、 结果计算以1.0mmol/L的FeSO4为标准，样品抗氧化活性以达到同样吸光度值为一个FRAP值，计算结果[1]Benzie I F F, Strain J J. The Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) as a Measure of “Antioxidant Power”: The FRAP Assay[J]. Analytical Biochemistry, 1996, 239(1):70-6.[2] Katarzyna Szafrańska, Rafał Szewczyk, Krystyna Maria Janas. Involvement of melatonin applied to Vigna radiata, L. seeds in plant response to chilling stress[J]. Central European Journal of Biology, 2014, 9(11):1117-1126.2兰花书屋。