琼脂糖凝胶电泳注意事项

琼脂糖凝胶电泳操作及其注意事项欢迎大家一起交流！欢迎大家一起交流！什么是电泳？带电颗粒在电场作用下，向着带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称与其电性相反的电极移动，称为为电泳电泳生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子在电场中,带电颗粒向正极或负极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号按按分离原理分离原理的不同，电泳分为的不同，电泳分为4 4类类:移动界面电移动界面电泳泳 区带电泳区带电泳 等电聚焦电等电聚焦电泳泳 等速电泳等速电泳电泳有几类？电泳有几类？琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的琼脂糖凝胶电泳原理琼脂糖凝胶电泳原理琼脂糖凝胶电泳的操作操作步骤 配胶 点样 电泳 成像拍照 EB染色 胶图分析1、配胶 按所要分离的DNA分子的大小，称取适量的琼脂糖粉末，放入锥形瓶，加适量1TAE电泳缓冲液;然后置微波炉内加热摇匀至完全溶化呈透明状，适当冷却后倒入胶托;胶完全冷凝后放入电泳槽，电泳槽里的缓冲液必须没过胶面2、点样！根据样品不同可分两种点样体系：A、样品+6Xloading bufferB、样品可直接点样（如ssp）最后记得点marker，并摆正胶的位置点样3、电泳！点完样后连接电源，设置好电源的参数，开始电泳。

当溴酚兰的带（蓝色）的移动至一定长度即可停止电泳电压要求：20V/CM胶，在样品出孔用低压（3V/CM，15min），然后调回标准电压，跑出的条带较好电泳槽4、EB染色 溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间在紫外线照射EB-DNA复合物时，出现不同的效应注意：严格区分污染区和非污染区，不把污染区的物品拿到非污染区，碰过EB的手套要及时丢弃！EB染胶区5、成像拍照 Tanon-2500数码凝胶图像分析系统把图像摄录、处理、打印一体化采用高分辨率CCD，高质量、高清晰度，保证摄录凝胶图像在低照度下的灵敏 度、不掉失条带Tanon-2500数码凝胶图像分析系统6、胶图分析 以SBT-PCR为例，主要做A、B、DR三个位点，每个位点条带大小不同.注意事项一、配胶 1.电子称的使用，要时刻注意保持电子称的精确性，保持清洁，根据不同的浓度的胶称琼脂糖2.加TAE的量要适当，以免配出来的胶太薄导致胶孔太浅或浓度太低3.倒胶前胶托一定要洗干净，并擦干；倒胶时要待胶冷到一定温度摇匀尽量不要产生气泡若胶液的温度太高要顶在胶托防止胶托变形二、点样电泳 孔塑料板要干净，loading要点均匀，控制在12ul的量，并做好对应标记。

2.加样时，枪头要上紧，吸样均一准确，排液时吸头不要有残留3.点完样后及时盖上胶垫，注意不要盖反4.点电泳前最好检查待用胶是否合格；点电泳时要对准胶孔，尽量点完所有的样5.点完样勿忘点marker并摆正胶位，电泳仪正负极不要插反，电泳槽的盖子要盖紧三、EB染色 1.切胶要准，取胶要稳，泡胶要慎，避免EB溅起2.碰到EB的手套要及时丢弃液要适时跟换，盘子要清洗4.抹布要严格区分，不可交叉使用四、Tanon Tanon-2500 数码凝胶图像分析仪的使用 1.使用前要注意清洁，以免影响胶图的清晰度2.照胶时尽量减少开紫外灯的时间3.拍照时先关摄像头再关紫外灯，不可颠倒，严格按照照胶的流程进行4.照好的胶及时丢弃琼脂糖凝胶电泳中常见“问题”胶图 。