9种氨基酸UPLC分析方法(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)

精选优质文档-----倾情为你奉上9种氨基酸UPLC分析方法（异硫氰酸苯酯柱前衍生法）2013-09-05方法：HPLC基质：标准溶液应用编号：化合物：Asp（天冬氨酸） Glu(谷氨酸) Ser(丝氨酸) Gly(甘氨酸) His(组氨酸) Arg(精氨酸) Thr(苏氨酸) Ala(丙氨酸) Pro(脯氨酸) Tyr(酪氨酸) Val(缬氨酸) Met(蛋氨酸) Cys(胱氨酸) IIe(异亮氨酸) Leu(亮氨酸) Nle(正亮氨酸) Phe(苯丙氨酸) Trp(色氨酸) Lys(赖氨酸)固定相：Endeavorsil C18色谱柱/前处理小柱：样品前处理：1 溶液配制： 氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准品，用0.1 mol/l HCl水溶液溶解，配成氨基酸单标浓度为0.05 mol/l 氨基酸使用液：将储备液用0.1 mol/l HCl水溶液稀释，得到浓度为0.002 mol/l的氨基酸单标和混标，待衍生 0.1 mol/l HCl水溶液：量取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 异硫氰酸苯酯（PITC）溶液：将250 μl异硫氰酸苯酯用乙腈定容至10 ml，得到0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液 三乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml，得到1.0 mol/L三乙胺溶液 0.1 mol/l HCl水溶液：量取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 2 标准溶液衍生化： 量取200 μl氨基酸混合使用液，置于1.5 ml塑料离心管中，准确加100 μl 1 mol/l三乙胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/l异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，室温反应1小时，然后加入正己烷400 μl，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μl下层溶液与800 μl水混合，0.22 μm针式过滤器过滤，待分析。

色谱条件：色谱柱：Endeavorsil C18，100×2.1 mm，1.8 μm (Cat#:87003) 流动相： A：0.05 mol/L乙酸钠水溶液（冰乙酸调节pH至6.50±0.05） B：甲醇：乙腈：水=20：60：20（V：V：V） 流速：0.3 mL/min 柱温：35 ℃ 检测器：UV 254 nm 进样体积：2.0 μL文章出处：天津应用实验室关键字：天然氨基酸、Asp（天冬氨酸）、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、IIe(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Nle(正亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)、UPLC、奋进、Endeavorsil C18、异硫氰酸苯酯、柱前衍生、PITC谱图：专心---专注---专业。