DNA提取液配方及步骤

裂解液配方：lOOmmolTris-Hcl(PH8.O);25mmolEDTA(PH8.0);5OOmmolNaCl;l%SDS母液配制：l.5OOmmolTris-Hcl（PH8.O）称取15.1425gTris，加入150ml蒸馏水，加入Hcl调PH至8.0,定容至250ml2.100mmolEDTA或EDTA-Na2称取7.3062gEDTA或8.455gEDTA-Na2,加入200ml蒸馏水，调PH至8.0,定容至250ml3.5molNaCl称取29.22gNaCl,加入90ml蒸馏水，定容至100ml4.10%SDS称取10gSDS,加入100ml蒸馏水蛋白酶K配置：10mg/ml蛋白酶K溶液称取10mg蛋白酶K粉末，加入1ml蒸馏水溶解20度保存配制1000ml裂解液：加入溶液1体积为200ml，加入溶液2体积为250ml,加入溶液3体积为100ml,加入溶液4为100ml配制500ml裂解液则相应减半步骤：1. 在1.5ml离心管中加入0.2ml（200ul）裂解液，用配套的研磨棒杵成浆状，加入2ul浓度为10mg/ml的蛋白酶K至终浓度100ug/ml,45度水浴2-4h。

2. 加入RNaseA至终浓度20ug/ml,水浴30min3. 加入0.7ml苯酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）,轻微颠倒混匀，14000rpm离心5min4. 中号枪头切去头部，抽取上清，重复抽提一次5. 取上清，加入等体积氯仿：异戊醇（24:1）,14000rpm离心5min6. 取上清，加入2-2.5倍体积的无水乙醇，颠倒混匀，材料用量较多的昆虫可看到DNA沉淀,材料用量较少或酒精长时间浸泡着的标本可在-70度放置30min,14000rpm离心5min7.75%乙醇漂洗沉淀两次，无水乙醇漂洗，室温干燥8.根据沉淀量，加入30-50ulddH2O方法二：1. 在1.5ml离心管中加入0.1ml（100ul）裂解液，用配套的研磨棒杵成浆状，用400ul裂解液冲洗研磨棒，加入5ul浓度为10mg/ml的蛋白酶K至终浓度100ug/ml,45度水浴1-2h2. 加入RNaseA至终浓度20ug/ml,水浴15min3. 加入等体积苯酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）,轻微颠倒混匀，14000rpm离心5min4. 取上清，加入等体积氯仿：异戊醇（24:1）,14000rpm离心5min。

5. 取上清，加入2-2.5倍体积的无水乙醇，14000rpm离心10min6.75%乙醇漂洗沉淀两次，无水乙醇漂洗，室温干燥7根据沉淀量，加入30-50ulddH2O。