火腿肠中亚硝酸盐含量的测定修正版

火腿肠中亚硝酸盐含量的测定火腿肠中亚硝酸盐含量的测定-分光光度法分光光度法15级24班B组杨泽奇 檀雨钊 贺仁杰 覃正前 杜 坤组员分配组员分配资料查找：檀雨钊 覃正前 杜坤方案设计：檀雨钊 杨泽奇PPT制作：杨泽奇 贺仁杰PPT陈述：小组全体成员实验目的实验目的1熟悉可见分光光度计的使用方法2掌握火腿肠中的亚硝酸盐的含量测定的原理和方法3熟悉吸收曲线绘制的方法亚硝酸盐的作用与测定意义亚硝酸盐的作用与测定意义火腿肠是一种富含蛋白质，风味独特，方便实惠而深受人民喜爱的肉制品在加工过程中添加适量的亚硝酸盐与火腿肠中的某些成分作用，从而使火腿肠呈现良好的色泽，因此亚硝酸盐称为发色剂在火腿肠工业生产中，原料内的红色是由肌红蛋白及血红蛋白所呈现的感官性状亚硝酸盐是氮循环的中间产物，不稳定，如果摄取过多的亚硝酸盐，可使血红蛋白变成高铁血红蛋白，失去输氧能力，引起肠原性青紫症，中枢神经系统缺氧而受损，呼吸困难，循环衰竭，并造成血管扩张，血压下降，特别是亚硝酸盐被还原成亚硝酸胺后，是一个已确定的致癌物质所以强制检验火腿肠生产企业中的加入亚硝酸盐与其含量具有非常重要的作用我国卫生标准GB2760张规定：火腿肠肉制品中亚硝酸盐的残留量应/kg。

实验原理实验原理-陈述人：杨泽奇陈述人：杨泽奇 本实验采用盐酸-萘乙二胺法，其原理是用70蒸馏水从样品中提取亚硝酸根离子,再经亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质、除去脂肪后；即过滤得到的清夜中的亚硝酸盐在弱酸条件下与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物后，与萘乙二胺偶联生成红紫色的偶氮染料，并通过绘制吸收曲线得到最大吸收波长，将产物在最大吸收波长下用分光光度计测量其吸光度，并与标准曲线比较从而得到清夜中的亚硝酸盐含量其反应式如下：实验试剂与仪器仪器：可见分光光度计，分析天平，水浴锅，比色皿（1cm），比色管（50ml），容量瓶（100ml），吸量管（1ml、5ml、10ml）、烧杯、胶头滴管、洗耳球，研体，漏斗，铁架台等试剂：0.05mg/ml亚硝酸盐标准液,6mg/ml对氨基苯磺酸，6mg/ml盐酸-萘乙二胺，饱和硼砂溶液，亚铁氰化钾溶液，乙酸锌溶液01样品品处理理称取称取3g捣碎且碎且搅拌均匀的火腿拌均匀的火腿肠与与50ml烧杯杯中，加入中，加入饱和硼砂溶液和硼砂溶液7.5ml，以玻璃，以玻璃搅匀，匀，以以70左右的蒸左右的蒸馏水水约100ml将其全部洗入将其全部洗入250ml的容量瓶中，置于沸水浴中加的容量瓶中，置于沸水浴中加热15 min，取出冷却至室温，一，取出冷却至室温，一边振振荡一一边加入加入5ml亚铁氰化化钾溶液，溶液，摇匀，再加入匀，再加入5ml乙酸乙酸锌溶液以沉淀蛋白溶液以沉淀蛋白质。

加入蒸加入蒸馏水定容至刻水定容至刻度，度，摇匀，静置匀，静置30min除去上层皮脂肪，皮脂肪，清夜用清夜用滤纸过滤，弃去初，弃去初滤液液30ml，收集，收集滤液液备用用步骤02亚亚硝酸硝酸盐盐氮氮标标准溶液的配制准溶液的配制取取10.00ml眼硝酸眼硝酸盐盐氮氮标标准准储备储备液，置于液，置于100ml容量瓶中，加水稀容量瓶中，加水稀释释至刻度得到至刻度得到0.005mg/ml亚亚硝酸硝酸盐盐氮氮标标准溶液准溶液步骤03系列系列标标准溶液配制准溶液配制在一在一组编组编号号16的的50ml的比色管中，的比色管中，分分别别加入加入0、0.50、1.00、1.50、2.00和和2.50ml亚亚硝酸硝酸盐盐氮氮标标准液，用准液，用蒸蒸馏馏水稀水稀释释至至25ml刻度，分刻度，分别计别计入入1.00ml对对氨基苯磺酸，密塞混匀，静氨基苯磺酸，密塞混匀，静置置5分分钟钟分别别加入加入1.00ml醋酸醋酸钠钠和和a-萘萘胺，稀胺，稀释释至至50ml刻度，静置刻度，静置10分分钟钟步骤04吸收曲吸收曲线线的的绘绘制制以以1号溶液做空白号溶液做空白调调零，零，对对4号有色溶号有色溶液于液于470nm570nm波波长长范范围围内，每内，每隔隔10nm分分别测别测其吸光度，每次其吸光度，每次变换变换波波长长均用均用1号溶液做空白号溶液做空白调调零后再零后再测测定，并定，并记录结记录结果。

以波果以波长为长为横坐横坐标标，以吸光度以吸光度为纵为纵坐坐标绘标绘制曲制曲线线，从曲，从曲线线上找出最大波上找出最大波长长步骤05工作曲工作曲线线的的绘绘制制以以1号溶液做空白号溶液做空白调调零，在零，在最大波最大波长长下分下分别测别测定定26号号标标准系列溶液的吸光度准系列溶液的吸光度步骤06样样品品测测定定在在50ml比色管中加入比色管中加入样样品溶液至品溶液至25ml刻度，分刻度，分别别加入加入1.00ml对对氨基氨基苯磺酸，密塞混匀，静置苯磺酸，密塞混匀，静置5分分钟钟；分；分别别加入加入1.00ml醋酸醋酸钠钠和和盐盐酸酸-萘萘乙二乙二胺胺，加蒸，加蒸馏馏水稀水稀释释至至50ml刻度，静刻度，静置置10分分钟钟同等条件下同等条件下测测定定样样品溶液品溶液的吸光度的吸光度步骤实验数据记录与处理实验数据记录与处理将实验数据填入下表，并绘制吸收曲线，找出最大波长(nm)吸光度/A将系列标准溶液及样品的测定结果列于下表：编号 1 2 3 4 5 6 样品 V总 (ml)吸光度（A）3.计算样品中亚硝酸盐氮含量Cx是从工作曲线上查得标准液中的NO2-的浓度（mg/ml），Vx为样品体积（ml）W为火腿肠中的亚硝酸盐含量，m0为所取得火腿肠质量在实验方案设计里有提到，目前火腿肠中的亚硝酸盐含量测定方法有分光光度法、传感器、发光分析法、气象色谱法、电极法及简便的试剂或试纸法等。

经参考文献和资料，本实验采用的是分光光度法较为适宜分光光度法设备简单、操作简便快捷、灵敏度高、稳定性好、结果直观、线性范围宽，用于肉制品中亚硝酸盐的残留量分析获得满意结果，一直占据有十分重要的地位上述其它方法有些要求的分析条件较苛刻、操作复杂、费用较高,或干扰因素较多,因此还未能得到广泛应用比如：传感器法应用到汞电极，而由于亚硝酸根还原电位太低直接应用汞电极测定较难参考文献：电化学传感器测定食品中亚硝酸盐的研究进展）经过文献分析得到，分光光度法较适合本实验操作方案可行性分析方案可行性分析方案可行性分析方案可行性分析实验原理是否正确，可行实验步骤是否简单，便捷实验操作是否安全，合理实验现象是否明显是否符合绿色化学要求分光光度法基于物质对光的选择性吸收的特点而建立起来的一种分析方法，因其投资小，操作简便，而得到广泛应用分光光度法具备操作快捷、设备简单、灵敏度高、结果直观等优点；亚硝酸盐经典的化学分析方法是 Griess 分光光度法该方法成熟、重现性好，准确度高，但耗时，易受其它杂质干扰，该方法中显色反应和所用试剂稳定性差，易受温度和显色试时间的影响毒性较大大、致癌性强，对环境和分析人员易造成危害，形成二次污染。

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