生产菌种的来源

第二章第二章 生产菌种的来源生产菌种的来源微生物工程的工业生产三个要素：微生物工程的工业生产三个要素：生产菌种的性能生产菌种的性能 发酵及提纯工艺条件发酵及提纯工艺条件 生产设备生产设备其中其中优良的菌种优良的菌种是最重要的是最重要的微生物是发酵工业的灵魂微生物是发酵工业的灵魂（张星元、木下祝郎）（张星元、木下祝郎）菌种菌种是发酵成功的内因若设是发酵成功的内因若设备条件已确定，备条件已确定，可通过改良菌种可通过改良菌种挖掘生产潜力；在设备、菌种确定挖掘生产潜力；在设备、菌种确定的情况下，的情况下，可通过优化发酵工艺可通过优化发酵工艺条件发挥菌种潜力条件发挥菌种潜力优良菌种可优良菌种可大幅度增加生产，提高产品质量，大幅度增加生产，提高产品质量，简化操作，提高经济效益简化操作，提高经济效益微生物工程的常用菌种及其作用生产上常用的微生物主要是细菌、放线菌、酵母菌、霉菌，另外还有一些担子菌、藻类、生物工程菌等细 菌1.大肠杆菌：最早用做基因工程的宿主菌工业上常用于生产谷氨酸脱羧酶、天冬酰胺酶和制备天冬氨酸、苏氨酸、缬氨酸等2.枯草杆菌：生产淀粉酶、蛋白酶、氨基酸和核苷等3.乳酸菌：4.醋酸杆菌：5.北京棒状杆菌：谷氨酸6.纤维素分解菌7.光合细菌放 线 菌1.链霉菌属：链霉素、土霉素、卡那霉素、丝裂霉素、制霉菌素2.小单孢菌：庆大霉素3.诺卡氏菌：利福霉素、瑞斯托菌素，石油脱蜡、烃类发酵、污水处理酵 母 菌1.酿酒酵母：酒、酒精、SCP、面包，核酸、Vc、辅酶等2.热带假丝酵母：石油蛋白、饲料蛋白生产3.产朊假丝酵母：SCP4.白地霉：生产药用和饲料用的酵母菌体蛋白、提取核酸、合成脂肪霉 菌1.根霉：酿酒工业，生产淀粉酶、脂肪酶等。

黑根霉、米根霉、华根霉2.毛霉：生产腐乳、乳酸、琥珀酸、甘油、转化甾体化合物等，糖化能力强3.红曲霉：制备红曲、酿红酒、制醋，生产腐乳、蛋白酶、淀粉酶、柠檬酸4.曲霉：生产有机酸5.青霉：有机酸、抗生素担子菌：藻类：螺旋藻，单胞藻生产石油生物工程菌：胰岛素、干扰素等二、生物物质产生菌的筛选二、生物物质产生菌的筛选 2.1.微生物是生物活性物质的丰富资源微生物是生物活性物质的丰富资源 微生物是地球上分布最广、物种最丰微生物是地球上分布最广、物种最丰富的生物种群，所以微生物现在和将来都富的生物种群，所以微生物现在和将来都是具有各种生物活性的新产物的丰富资源是具有各种生物活性的新产物的丰富资源微生物的生长环境土壤一般土壤，盐碱土，沙漠水域江、河、湖水、污水、污泥、盐湖、海水动物体表、肠道、反刍胃、昆虫消化道植物叶面、根际、热带雨林极端环境 深海高温泉、深海火山口、极地、高山冻土特殊环境 污染土壤、污染水域、沼气池大气陆地和水域中未被培养微生物比例的估计生境可培养微生物的比例%生境可培养微生物的比例%海水0.001-0.1活性污泥1-15淡水0.25沉积物0.25半自养湖0.1-1土壤0.3未污染河口0.1-3 如何筛选？如何筛选？关键在于要根据关键在于要根据生产实际需要生产实际需要、目的代目的代谢产物的性质谢产物的性质、可能产生所需产物微生物菌、可能产生所需产物微生物菌种的种的分类地位分类地位、这类、这类微生物分布微生物分布、特性特性以及以及生态环境生态环境等，设计选择性高的等，设计选择性高的分离筛选方法分离筛选方法，才能快速从可能的环境和混杂的多种微生物才能快速从可能的环境和混杂的多种微生物中获得所需菌种。

中获得所需菌种一般菌种分离纯化和筛选步骤如下：一般菌种分离纯化和筛选步骤如下：标本采集标本采集 标本材料的预处理标本材料的预处理 富集培养富集培养 菌种初筛菌种初筛 菌种复筛菌种复筛 性能鉴定性能鉴定 菌种保藏菌种保藏2.1.2.标本采集标本采集 选择标准：选择标准：1.1.对于天然材料，来源越是广泛的样品，越对于天然材料，来源越是广泛的样品，越有可能获得新的菌种；有可能获得新的菌种；2.2.可以寻找已适应相当苛刻的环境压力的微可以寻找已适应相当苛刻的环境压力的微生物类群如高温、高压、高盐、高生物类群如高温、高压、高盐、高pHpH、低、低pHpH或或海水等极端环境海水等极端环境2.1.3.标本的预处理标本的预处理(1)(1)采用热处理方法减少材料中的细菌数采用热处理方法减少材料中的细菌数(2)(2)采用膜过滤和离心的方法浓缩水中的细胞采用膜过滤和离心的方法浓缩水中的细胞(3)(3)采用化学方法采用化学方法(4)(4)诱饵法：将固体基质（如蛇皮、花粉）等加到诱饵法：将固体基质（如蛇皮、花粉）等加到待检的土壤或水中，待其菌落长出后再铺平板分待检的土壤或水中，待其菌落长出后再铺平板分离5)(5)空气搅拌法空气搅拌法：在空气中搅拌，收集孢子沉淀，：在空气中搅拌，收集孢子沉淀，如稻草的处理。

如稻草的处理在采集的样品中，如果目的微生物是优势在采集的样品中，如果目的微生物是优势菌，则可以直接分离纯化，但多数情况下不是菌，则可以直接分离纯化，但多数情况下不是优势菌，因此需要设法增加分离菌的数量，这优势菌，因此需要设法增加分离菌的数量，这就需要进行富集培养就需要进行富集培养富集培养：富集培养：又称增殖培养，就是利用不同微生又称增殖培养，就是利用不同微生物生长对环境和培养基的特殊要求，设计选择物生长对环境和培养基的特殊要求，设计选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适环境中大量繁殖，由原来自然条件下物在最适环境中大量繁殖，由原来自然条件下的劣势种变为人工环境下的优势种，以利于分的劣势种变为人工环境下的优势种，以利于分离2.1.4.富集培养富集培养2.2 菌种的分离菌种的分离1 施加选择性压力分离法施加选择性压力分离法2 随机分离方法随机分离方法 2.2.1 施加选择性压力分离法施加选择性压力分离法 利用不同种类的微生物对环境和营养要求的不利用不同种类的微生物对环境和营养要求的不同，人为控制这些条件，使之利于某类或某种微同，人为控制这些条件，使之利于某类或某种微生物的生长，而不利于其他种类微生物的生存，生物的生长，而不利于其他种类微生物的生存，以达到使目的菌种占优势，而得以快速分离纯化以达到使目的菌种占优势，而得以快速分离纯化的目的。

的目的分离培养基的效率取决于其分离培养基的效率取决于其养分，养分，pH和加入的和加入的选择性抑制剂选择性抑制剂等培养方法：液体培养方法和固体培养方法培养方法：液体培养方法和固体培养方法 固体培养方法固体培养方法：固体培养基常用于分离某些酶固体培养基常用于分离某些酶产生菌，其选择培养基中常含有所需酶的基质，产生菌，其选择培养基中常含有所需酶的基质，以便促进酶产生菌的生长以便促进酶产生菌的生长如蛋白酶、脂肪酶、果胶酶等如蛋白酶、脂肪酶、果胶酶等液体培养方法液体培养方法：摇瓶培养（分批式富集培养）：摇瓶培养（分批式富集培养）连续培养（恒化式富集培养）连续培养（恒化式富集培养）摇瓶培养（分批式富集培养）摇瓶培养（分批式富集培养）：是指将富集培养：是指将富集培养物转接到新的同一种培养基中，重新建立选择性物转接到新的同一种培养基中，重新建立选择性压力，如此反复转种几次后，再取此富集培养物压力，如此反复转种几次后，再取此富集培养物接种到固体培养基上，以获得单菌落接种到固体培养基上，以获得单菌落转种的时间转种的时间是关键，应在所需菌种占优势的是关键，应在所需菌种占优势的情况下移种情况下移种连续培养（恒化式富连续培养（恒化式富集培养）集培养）：通过改变限通过改变限制性基质的浓度来控制两制性基质的浓度来控制两类不同菌株的比生长速率。

类不同菌株的比生长速率2.2.2 随机分离方法随机分离方法 有些微生物的产物对产生菌的筛选没有任何选择有些微生物的产物对产生菌的筛选没有任何选择性好处，因此，常采用随机的方法分离所需菌种性好处，因此，常采用随机的方法分离所需菌种1.抗生素产生菌的分离抗生素产生菌的分离 把潜在的产生菌生长在含有试验菌的平板上可以鉴把潜在的产生菌生长在含有试验菌的平板上可以鉴定产生菌的抗微生物作用也可以将微生物分离株生定产生菌的抗微生物作用也可以将微生物分离株生长在液体培养基中，检测其无细胞滤液的抗菌活性长在液体培养基中，检测其无细胞滤液的抗菌活性包括包括抑菌圈法、稀释法、扩散法、生物自显影法抑菌圈法、稀释法、扩散法、生物自显影法等在这些方法中，在这些方法中，实验菌的选择实验菌的选择是关键2.抗肿瘤药物产生菌的分离抗肿瘤药物产生菌的分离 抗肿瘤药物作用机理抗肿瘤药物作用机理：破坏核酸或：破坏核酸或抑制核酸生物合成利用这一原理筛选抑制核酸生物合成利用这一原理筛选抗肿瘤药物的常用方法有生化诱导分析抗肿瘤药物的常用方法有生化诱导分析法和法和SOS生色检测法生色检测法3.酶抑制剂产生菌的分离酶抑制剂产生菌的分离 原理：原理：如果某种化合物能在体外抑制某种关键如果某种化合物能在体外抑制某种关键的人体酶，它就有可能在体内有药理作用。

酶的人体酶，它就有可能在体内有药理作用酶抑制剂产生菌的筛选，主要选择与生理和病理抑制剂产生菌的筛选，主要选择与生理和病理关系明确的酶作为靶酶进行筛选关系明确的酶作为靶酶进行筛选4.生长因子产生菌的分离生长因子产生菌的分离 通过观察分离株能否促进营养缺陷型的生通过观察分离株能否促进营养缺陷型的生长，便可检出生长因子产生菌长，便可检出生长因子产生菌5.多糖产生菌的分离多糖产生菌的分离 曾从各种环境中分离出多糖产生菌，有人认为曾从各种环境中分离出多糖产生菌，有人认为制糖工业污水中可能含有很多这种菌种从这种制糖工业污水中可能含有很多这种菌种从这种环境获得的分离株，可在适当的培养基中生长，环境获得的分离株，可在适当的培养基中生长，并可从菌落的粘液状外观识别这类产生菌并可从菌落的粘液状外观识别这类产生菌2.3筛选与性能鉴定分离就已经结合了筛选，平板法就是初筛，但只能淘汰85-90%的微生物，复筛往往通过摇瓶培养进行性能鉴定主要包括毒性和生产性能试验小 结微生物工程的工业生产具有哪三要素？一般菌种分离纯化和筛选的步骤是什么？常用的标本预处理的方法有哪些？举例说明菌种分离的方法有哪些？。