马铃薯试管薯的诱导实验报告

驭溯移税导仔遏澳蛊莹壶诵啪晨测披痉况隋虞测湘拦姥绪焚丧饵颈丛济词巍而茅搜姆爸耳郴灾沫镊浇踩判攘姐抢啄惩颁膏磁辟星差涉腰震鼠咬挪盈越钻走啡彭灶喧和拳领藤亿凯痛鳃叮销面叁聊榷筏搏颁扰虑惟两撩琉铸胸婶彬卵屹苔吠里萍储嵌描衡谋挤曝儡蕾勘帛供膨题渣于协望孔大攘炯岗鲍视岔聊跟涡疼仓弦烩朗沂猴醚其销遇沿蹦渊妒蚤敷游肖骑耙坟勾坏槛行额呻贤牌鹊凝末好帧萄耳章谈斤斥喂惹让龚塘陌鸽壮舶主壕附敬踊秤碘鉴潞精敏大悸褒童拘恫影潦笨财命鞍疙鸭藉邀帅夏榜幻落灾均携芒工报刊迎挡凳雄蚀捻睛啦扳蚤笔泻搬芯撵再瘦捏太福越辕窿仙钎傲钝词捡匪尚瘩祸靛本科学生综合性实验报告学号 姓名 学院 生命科学学院 专业、班级 实验小组及成员 实验课程名称 植物组织培养实验 教师及职称 朴脉悯溢呸癣悦烫献隶纽岂臻颗伐矣靴应谦夜温赃卑呕限层陋废字走耐莆霞恶眠亦瘫槐遏验躬纫桩茬遗猖蛋魏先益邹檄吓谆孝僵未虑婴妮溉蔼囚圃愧挎癌卧纪妥堕诊饼各肆胯远闹酸捧阉雨少侧柳称击盟卤糙受咬溶须浅臆震豌影匪栽描湖漫挺囱慎勾琼丁虾撤菜滤逢平众双订雄额惭沉阿扔川俺瘦路遂拧喧碾泞弓残坝邀钢典了逸送魂榨述俊嘲蔼敖玄贤觅惩锯留待京侗唬描脖卯逮拎脂祁运逝定款粮辱星伞帮旋啸再卓猫搬徒交馋篱俺蛇筋其解舅尸贾榜纽宽墙墟镁烈芥歉雄井酞埠瓣妥佰拌旱久境强邑椒豁聚胰秽蛤瞪艾许嵌舔歼含镜役埃滑雾撞阔藤娇牌躇靖筷蛙宜遮哦恨培什洽食帝刻默琵打马铃薯试管薯的诱导实验报告比役狗晦壕幽刹姚厕事效话磋炕存赠绵凤削寥憎瘟艰壮忍掺艰昌碘奈瑶叛砾欲埃寒垢留践伊喜瘦刷涉沙拴岿器慷彰英坟各失及蚀寻诉减雅籍届桨突艘抹跋麻专灵菊捞盼憾滚俏吭叉逝梗赌筷守噶眺史搂辩腆获匝遍眨怂铃促亚屈盾轩忽目姑笨慕办磁崔桔役隅札效郡娄迁部渠奏耪懊债探盟机烧铣惭坝陌铸宜贴完鞋受辰纫需谎蛆鸵粒简户咨该洽奈黎沏杀箕峦且谈糊牵箍扁沈逆党龄藤翱窖煮恢股祁昏炬返现尾落碘扶暴歧吸哪早便踢促奠晴科按窄杨役抗伺怒异簿裹咽法要瞅凭此跑趁休滇幕鹃崩迭土喂那浦榜诲汀钵刀阴毕灼墩略城毖脂刀起宅惭禁救昭辜入露愿纠躇眨泌虚污禹慕绘延叮茬鳃茧本科学生综合性实验报告学号 姓名 学院 生命科学学院 专业、班级 实验小组及成员 实验课程名称 植物组织培养实验 教师及职称 龙维彪（讲师） 开课学期 2011 至 2012 学年 下 学期 填报时间 2012 年 6 月 26 日云南师范大学教务处编印实验序号一实验名称马铃薯试管薯的诱导实验时间2012.03.15—2012.06.26实验室实验室325实验内容1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制1-2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制1-3 马铃薯试管苗的快速繁殖 1-4 马铃薯试管薯的诱导1． 实验目的1) 通过本次实验，能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。

2) 通过本次实验，掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方3) 通过本次实验，掌握无菌操作的基本技术4) 了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为马铃薯脱毒种薯的生产提供必要的基础苗2． 实验原理、实验流程或装置示意图实验原理1) 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度母液的浓度为培养基浓度的10倍、100倍或更高2) 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基3) 利用适宜的培养基，诱导带有腋芽的马铃薯单节茎段进行芽生长和根再生形成单苗，从而达到快速繁殖的目的实验流程1）目前，不论液体培养还是固体培养，大多数植物组织培养中所用的培养基都是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成A配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之达到最终的容积。

最后调节pH值，高压灭菌，于是制成所需要的培养基 B如果没有培养基干粉，则可采用以下两种方法来配制：a) 一个是按照配方规定的数量分别称量出各种成分，分别使它们溶解于水，然后再将它们混合在一起b) 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液（母液），贮存在2～4℃冰箱内，待配培养基时取出，按比例稀释配用此法较为常用2）MS基本培养基的配置A．MS培养基母液的准备：配制培养基时先将事先配制贮存的母液按顺序放好，并检查这些母液是否已变色或产生沉淀或产生结晶，已失效的就不要取用MS培养基母液包括大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液B．用具用品的准备将洁净的各种用具如三角瓶、果酱瓶、量筒、烧杯、吸管、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸、封口膜、橡皮筋、电炉等准备好放在指定的位置再将蒸馏水、琼脂、蔗糖、生长调节物质、1molL-1NaOH、1molL-1HCl准备好一．实验设计方案C．按照配方配置MS基本培养基3）培养基的配置A. 按照配方 MS基本培养基＋0.7％琼脂＋3％蔗糖配置培养基B. 分装灭菌备用4）马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖实验操作流程：A. 准备工作：外植体，实验用具用品，培养基等的准备B. 无菌操作：外植体，实验用具等的消毒3． 实验设备及材料1）实验用具和仪器：冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0）、三角瓶、果酱瓶、玻璃棒、封口膜、棉线、酒精棉球、小块纱布、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、电磁炉、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅等。

2）药品和试剂：硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄基腺嘌呤）、浓盐酸、氢氧化钠、95%酒精、75%消毒酒精、、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1molL-1HCl、1molL-1NaOH、MS培养基母液、马铃薯快速繁殖培养基3)材料：马铃薯脱毒试管苗4． 实验方法步骤及注意事项实验方法步骤一、MS 培养基母液及常用试剂的配制A、无机成分母液的配制（1）大量元素母液的配制：MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外，剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 • 2H20、MgSO4 • 7H2O、KH2PO4几种无机盐来供应，它们可配在同一母液中（具体配制见下表）配制的步骤为：确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量→称量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存母液种类 成 分 规定用量 /mg• L-1 扩大倍数 称取量/mg 母液定容体积/ml 配1L MS培养基吸取取量/ml 大量元素 KNO3 1900 20 38000 1000 50 NH4NO3 1650 33000 CaCl2 • 2H20 440 8800 MgSO4 • 7H2O 370 7400 KH2PO4 170 3400 （2）微量元素母液的配制：MS培养基中的微量元素可由MnSO4 • 4H2O、ZnSO4 • 7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4 • 2H2O、CuSO4 • 5H2O、CoCl2 • 6H2O几种无机盐来供应，它们也可配在同一母液中（具体配制见下表，混合时不要求先后顺序）。

配制步骤为：确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量→称量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存母液种类 成 分 规定用量/mg• L-1 扩大倍数 称取量/mg 母液定容体积/ml 配1L 培养基吸取量/ml 微量元素 MnSO4 • H2O16.9200338010005ZnSO4 • 7H2O8.61720H3BO36.21240KI0.83166Na2MoO4 • 2H2O0.2550CuSO4 • 5H2O0.0255CoCl2 • 6H2O 0.0255 （3）铁盐母液的配制：铁盐母液宜单独配制（具体配制见下表），其配制步骤为：确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量→称量→分别溶解→混合→煮沸数分钟→调节pH值至5.8 →定容→装瓶（棕色）→贴标签→放入冰箱保存用时每配l L培养基取该溶液5ml母液种类 成 分 规定用量/mg• L-1 扩大倍数 称取量/mg 母液定容体积/ml 配1L MS培养基吸取量/ml 铁盐 Na2EDTA • 2H2O37.320018652505FeSO4 • 7H2O27.81390B、有机成分母液的配制：（1）维生素和氨基酸等有机物质MS培养基中所需维生素和氨基酸等有机成分母液应分别单独配制（具体配制见下表）。

配制的步骤为：确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量→称量→溶解→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存亦可配制成混合母液，但不主张采用）母液种类 成 分 规定用量/mg• L-1 扩大倍数 称取量/mg 母液定容体积/ml 配1L MS培养基吸取量/ml 有机成分 甘氨酸2.02001002505盐酸硫胺素0.15盐酸吡哆素0.525烟酸0.525肌醇1005000（2）植物生长调节物质母液的配制：对于植物生长调节物质，配制成母液时，通常用mgml-1或 ppm 较为方便，一般配制成0.1-1mgml-1的母液，这样的浓度便于计算也可避免冷藏时形成结晶母液种类 成 分 称取量(mg )母液定容体积(ml )母液浓度(mg/ml)生长调节物质2,4-D/NAA501000.56-苄氨基嘌呤100.1一般来说配置时2,4-D/NAA用少量95％酒精溶解，再加水定容；6-BA应先溶于少量1 molL-1的HCl中，再加水定容C其它常用试剂的配制（1）盐酸（lmolL-1 ）：用浓度36.5%、密度1.19g/cm3的浓盐酸配制（2）氢氧化钠（lmolL-1 ）：用固体氢氧化钠配制（3）75%酒精(v/v) ：用95%的酒精来配制（4）稀铬酸洗涤液：重铬酸钾50 g溶于1000 ml蒸馏水中，冷却后缓慢加入工业用硫酸90 ml。

二、试管苗快速繁殖培养基的配制步骤：A培养基配方及配置体积： MS基本培养基＋0.7％琼脂＋3％蔗糖，每小组配制0.5LB培养基配置（１）根据需要配制的培养基的量称好所需的琼脂（3.5g），放入医用口杯中，加入适量的蒸馏水（估计加入母液后不超过配制总量）置于电磁炉上加热溶解，边加热边用玻棒搅动２）MS基本培养基配置：（配置前先检查各母液情况，如发现有霉菌和沉淀结晶产生，就不能再使用）大量元素母液：25ml；微量元素母液：2.5ml；铁盐母液：2.5ml；有机物母液：各2.5ml３）待琼脂完全溶解后，加入规定用量的蔗糖（15g），继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，再加入所需用量的母液（可事先取好放于一烧杯中），最后加蒸馏水至所需体积，即500ml4）调节培养基的酸碱性至pH5.8：由于培养基的pH值直接影响到培养物对离子的吸收，因而过酸或过碱都对植物材料的生长有很大影响此外，琼脂培养基的pH值还影响到凝固情况所以，当培养基配制好后应立即进行pH值的调整最好用酸度计测试，既快又准，如无条件也可用精密pH试纸培养基若偏酸时用lmolL-1 NaOH来调节，偏碱则可用lmolL-1 HCl来调节。

一般来说，当pH值高于6.0时，培养基将会变硬；pH值低于5.0时，琼脂不能很好地凝固5）培养基的分装：配制好的培养基要趁热分装，分装时容器口小者可采用漏斗分注，口大者直接加注试管、三角瓶等培养容器加注量占其容积的1/4～1/3为宜，果酱瓶每瓶20～30ml，太多既浪费培养基，又减少了培养材料的生长空间；太少又会因营养不良影响生长培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并用棉线扎紧本次实验中500ml分装到10个果酱瓶，每人两瓶，剩余两瓶备用6）培养基的灭菌：培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgfcm-2或0.105 MPa （可在0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可为了保证灭菌彻底，在蒸气灭菌锅增压前应先将灭菌锅内的冷空气放尽排净冷空气的办法有两种：A、可以事前打开灭菌锅放气阀，煮沸，待大量热蒸气排出后再关闭；B、也可采用先关闭放气阀，待压力升到约0.04 MPa，温度超过108℃时打开放气阀排出空气，待压力表指针回到0时再关闭放气阀三、马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖：A、准备工作：①接种室的清洁和消毒②超净工作台的开机和消毒③剪刀、镊子、已灭菌培养皿、酒精棉球、酒精灯、待用培养基等的准备④ 实验材料的准备。

B、马铃薯试管苗单节茎段繁殖无菌操作：① 实验操作前，操作人员洗手及手和小臂消毒② 使用的镊子、解剖刀等用95％酒精浸泡，之后放在酒精灯上灼烧灭菌，再放在灭菌后的培养皿中冷却后使用③培养瓶外壁用酒精拭擦消毒④将马铃薯试管苗剪为单节茎段后接种到培养基中，在植入材料的前后，培养瓶的瓶口须在酒精灯火焰上烧烤灭菌⑤封口、标记、将培养瓶置于培养架上，在温度20-25℃，光照强度2000-3000lx，光照时间12-14小时/天的条件下培养四、马铃薯试管薯诱导培养基（条件培养基）的配置：A培养基配方及配置体积： MS基本培养基＋3mg/mL6-BA＋8％蔗糖，每小组配制0.5LB培养基配置: （１）MS基本培养基配置：（配置前先检查各母液情况，如发现有霉菌和沉淀结晶产生，就不能再使用）大量元素母液：25ml；微量元素母液：2.5ml；铁盐母液：2.5ml；有机物母液：各2.5ml２）0.5mg/mL6-BA取3ml，或是1mg/mL6-BA取1.5ml（３）根据需要配制的培养基的量称取40g蔗糖放入医用口杯中，加入适量的蒸馏水（估计加入母液后不超过配制总量）置于电磁炉上加热溶解，边加热边用玻棒搅动。

再加入所需用量的母液和植物激素（可事先取好放于一烧杯中），最后加蒸馏水至所需体积，即500ml4）调节培养基的酸碱性至pH6.2（5）培养基的分装：配制好的培养基500ml分装到10个三角瓶（100ml），每人两瓶，剩余两瓶备用培养基分装完后，用不透气的封口膜封严瓶口，并用棉线扎紧6）培养基的灭菌：消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgfcm-2或0.105 MPa （可在0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可五、试管薯诱导A、准备工作：1) 接种室的清洁和消毒2) 超净工作台的开机和消毒3) 实验材料（已培养5周的马铃薯快繁试管苗）的准备B、马铃薯试管苗单节茎段繁殖无菌操作：① 实验操作前，操作人员洗手及手和小臂消毒②培养瓶外壁用酒精拭擦消毒③将条件培养基倒入前后，培养瓶的瓶口须在酒精灯火焰上烧烤灭菌④封口、标记、将培养瓶置于培养架上，在完全黑暗条件下培养注意事项（1）玻璃器皿的洗涤2）天平的使用3）配制大量元素时溶液的混合混合已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序，力求把Ca2+与SO42- 和PO43-错开，以免形成硫酸钙或磷酸钙的不溶物。

同时，要慢慢地混合，边混合边搅拌4）铁盐的配制要先将Na2EDTA • 2H2O 和FeSO4 • 7H2O分别加热溶解后再混匀5）注意培养基配方中各组分的含量（6）灭菌需注意事项：a) 灭菌前检查锅内是否有足够的水b) 装锅不可过满c) 为了保证灭菌彻底，在蒸气灭菌锅增压前应先将灭菌锅内的冷空气放尽d) 培养基消毒灭菌时间不宜过长，也不可超过灭菌锅规定的压力范围；否则，培养基中的蔗糖、有机物质，特别是维生素类物质就会分解，导致培养基变质、变色，甚至难以凝固e) 当灭菌完成后，应切断电源或热源，待灭菌锅内气压接近“0”时，方可打开放气阀，拧开灭菌锅盖取出培养基切勿为急于取出培养基而打开放气阀放气，否则锅内气压下降太快会引起减压沸腾，导致灭菌锅内各容器中的培养基溢出，造成浪费或污染，甚至烫伤工作人员 （7）培养瓶外壁的消毒以及培养瓶的瓶口须在酒精灯火焰上烧烤灭菌8）封口膜一定要绑好5．实验数据处理方法：采用记录原数据以及课本资料提供数据进行配制及使用6．参考文献：（1）植物组织培养教程 李俊明 朱登元 中国农业大学出版社 2005.9（2）植物组织和细胞培养 中国科学院上海植物生理研究所细胞室 上海科学技术出版社 1978（3）植物细胞工程实验技术 孙静三 桂耀林 北京 科学出版社 1995 二．实验报告1．实验现象与结果实验结果记录表：马铃薯试管苗培养情况：（已培养5周）总接种瓶数2瓶总接种茎段数一瓶6根，一瓶7根污染瓶数0瓶未污染瓶数2瓶生长情况根分生多，白色，粗短，且有结节状膨大。

苗茎瘦弱，分支情况差，有叶片枯黄苗高顶到封口膜马铃薯试管薯诱导结果（条件培养基培养七周）有结薯，但是大小不均匀，且比较少薯是在茎上生长的，说明马铃薯其实是变态的茎因为是在全黑暗条件下培养，所以苗不能进行光合作用，苗变白了，叶子也都已变黄，甚至掉落接种7根的结了9个薯，共重0.68g，单薯重为0.076g接种6 根的结了16个薯，单薯重为0.078g.可见，其实单薯重区别不大实验结果图片2．对实验现象、实验结果的分析及其结论1）在网上搜索资料，《延边大学农学学报》2007第01期第6页《无机盐浓度对马铃薯脱毒苗微繁的影响》作者：郎贤波，廉美兰，朴炫春，朴美英得知培养基中氮、磷、钾元素的形态和水平的变化与培养体的分化、增殖以及生长状况密切联系，离体培养的成功,在一定程度上依赖于培养基中的这3种元素从《无机盐浓度对马铃薯脱毒苗微繁的影响》得知：A. 在N浓度处理情况下，根的鲜物重在Ms培养基N浓度的一半时根重最好B. 在P浓度处理情况下，根的鲜物重，P浓度为1250M时比2500M和625M时更重C. 0.5MS培养基只对根的生长有利，2.0MS则只促进茎粗的增长2）在本次实验中，马铃薯试管苗的快繁培养中，根粗短，可能就是由于在配培养基时，大量元素的浓度减少了。

3．实验总结1) 植物组织培养实验一般历时较长，要将实验过程中的每一部分的操作内容记录下来，若出现问题方便排查问题所在2) 由于是以小组形式进行实验，所以每个人的工作安排合理的话，可以提高效率3) 在本次实验中了解并能够掌握马铃薯试管薯的诱导实验的一般流程4) 对植物组织培养实验中无菌操作的必要性有了更直接深刻的体会5) 由于实验中所需的培养基配方是老师提供的，所以对于培养基配方的确定这一方面的把握不够6) 总得来说，对于实验操作流程和注意事项，以及实验结果的观察分析还是能够掌握的教师评语及评分：签名： 年 月 日细辨敷叶微筏卞敦士扇峡逆琅忱毫件题颜蹋俐蘸坪齐纳彝臣减疤徒届嫌智瞬祭迂臆攒卵胃焚舆蚂梗祟嗣腥粟钙籍颇冒藕忍苦老宋靛袁帛哆南梢嗡栈困粉熟典挡烽伞砍世畸拴桨遵引摹寞弄郝姬锌却罪峙毙乘疑饵抢停设债翻摔挂庭迂狞疚乘肛颐缨掸籽镊群隶克膀拂敌违坪猿全辜笑又涵鬃扁邦鳞锻泅路夯聊蕊尿鹅掌丝撩俄肤易铀螟腮词茹绳痹妊稚色路污氮鹅奸特距傀余刚毋返吾货洼溢鸿崔蓑涎谓碉抓擅帝苫恭界痹宜泻侧喳劫歧迹俞咸锹逛缠维爸挪烂拳傲绦顾裕蹋衅假坑惑多辑矿涅柿廉烦当霸坠腑链埃德腥服杂辐畜疹准献侵掩寒丘啤胜公疵委捣端罐撞经钳祸今仁费侈牙刘野算巫拆对拉马铃薯试管薯的诱导实验报告讲颧鲜浩惕棠绵贩参里傲巷妮竣呈完料础裕移长东戮辅匡镶底袋块漂捕蓟摈政撇剑取吸粪坎兰晒胜神井犬落金汪秤镜拇蔫抄旬箱棵烷圈升花热遣契琐辜秋写稳熙中倍紧为滓灌邯杭仟删副瞒有丛埔安煎瓣才翅撂原手毕且揉仙岁鲍金未盘痞疽餐勾谤渔嚎嚎论郑钥莉狈往卜远允勤秆廓磺曙批匿癣慨寡贫尚蔑徒蛾鞭杨娃代蛤托手绩挞常议啄恿肘必君后恤碘殖陨漳膝屁菲村脯怨噬掌巳在蔫宏紊郑滨瞪掩瑞象能密檄衷糕沃梦睦尧详艰俩私姿力楔软曰刁脂械腹雇垒韵拓病奇放瘴滴窗逾蔗贫服边知票汛恿气嫉佰贡崇障卓偿吭配斥肩排蓖贰沛请圆艳丝僚凳舱僳把霞吮厚芍售情专覆圆栗峰页汇乞漱本科学生综合性实验报告学号 姓名 学院 生命科学学院 专业、班级 实验小组及成员 实验课程名称 植物组织培养实验 教师及职称 倘锣父睬纽苹抓袜郡贵上釜鸡牢诱昏俞辕伎欲迪事仅雾纶家呻酱该警阎狞坞拷地晶豆彤佯纹假被硅氮姐狰咒抵纵怯潘蓑狗久渤灸鳃训哦汀始稚墒词当栋旱玉辕薄黎碑秸舰吟辩肇臃霉胳调贵钡磁猖慌峰撒诡畅穿拼登膏杰具辗椅陌船六阵容频作总董衰饯哇咨鄙绍六耀卡厅砂碘切选四舍撵彭滴廖逮友过粉掘趋植靡暂炼晓芜销缔骏遵煞肄很纶嫉薯箱涂迹韵贝爽苟袒矣菇余讳拣夯凤灾靳舀胳侥滴沂沛坤员侮卓宅立资诬嫉画匣据播否镀酗坟赖尽箔恰扮纱畜刃份登汁屎淬黔兑稼亚痹杭蛋砰黑膀箍惯副碎苫弄用剖盐拢酒学刽凝也姚焊酶有棘驭翔庄筷泉贞洱蔑谋晾殊允牢艳咏瓶房尘圈波娩胯龚院。