常用的消灭菌操作方法

形态各异的菌落形态各异的菌落无菌技术无菌技术1 1、概念、概念 泛指在培养微生物的操作中，所有泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染防止杂菌污染的方法获得纯净培养物的关键（目的）获得纯净培养物的关键（目的）:防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵2 2、无菌技术包括的四个方面（、无菌技术包括的四个方面（措施措施）（1 1）对实验操作）对实验操作空间、操作者的衣着和手空间、操作者的衣着和手进行进行清洁和消清洁和消毒毒；（2 2）将）将培养器皿、接种用具和培养基培养器皿、接种用具和培养基等器具进行等器具进行灭菌灭菌；（3 3）为避免周围微生物污染，）为避免周围微生物污染，实验操作实验操作应在应在酒精灯火焰酒精灯火焰附近附近旁进行；旁进行；（4 4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触3 3、消毒与灭菌、消毒与灭菌（1 1）消毒）消毒概念：概念：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的的部分微生物（部分微生物（不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子）常用常用方法方法:a a、煮沸消毒法、煮沸消毒法100100煮沸煮沸5-6min5-6minb b、巴氏消毒法、巴氏消毒法70-7570-75下煮下煮30min30min或或 8080下煮下煮15min15min条件：条件：条件：条件：用于用于一般物品一般物品的消毒。

的消毒适用范围：适用范围：适用范围：适用范围：对一些对一些不耐高温的液体不耐高温的液体，如牛奶的消毒如牛奶的消毒d d、紫外线消毒、紫外线消毒紫外线照射紫外线照射30 min30 min适用范围：适用范围：c c、化学药剂消毒、化学药剂消毒酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等，如酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等，如酒精擦拭双手酒精擦拭双手、氯气消毒水源氯气消毒水源等条件：条件：只适用于只适用于表面灭菌和空气灭菌，表面灭菌和空气灭菌，例如例如接种室、接接种室、接种箱或超净工作台种箱或超净工作台2 2）灭菌）灭菌概念：概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽包括芽孢和孢子孢和孢子常用常用方法方法:a a、灼烧灭菌、灼烧灭菌用于金属用具（用于金属用具（接种环、接种针接种环、接种针）、接种过程中）、接种过程中试管试管口和瓶口口和瓶口的灭菌；的灭菌；条件：条件：在酒精灯火焰的在酒精灯火焰的充分燃烧层充分燃烧层灼烧适用范围：适用范围：b b、干热灭菌、干热灭菌所用设备是所用设备是干热灭菌箱干热灭菌箱 操作方法及注意事项：操作方法及注意事项：装入待灭菌的物品将待灭菌的物品，如塞上棉塞的试管、将待灭菌的物品，如塞上棉塞的试管、锥形瓶、培养皿、吸管等玻璃仪器，锥形瓶、培养皿、吸管等玻璃仪器，用牛皮纸或干净的报纸包裹严密后，用牛皮纸或干净的报纸包裹严密后，放入干热灭菌箱。

注意，物品不要摆放入干热灭菌箱注意，物品不要摆得太挤，以免妨碍热空气流通同时，得太挤，以免妨碍热空气流通同时，灭菌物品也不要与干热灭菌箱内壁的灭菌物品也不要与干热灭菌箱内壁的铁板接触，以防包装纸烤焦起火铁板接触，以防包装纸烤焦起火灭菌灭菌关好干热灭菌箱的箱门，旋动恒温关好干热灭菌箱的箱门，旋动恒温调节器，设定温度为调节器，设定温度为160170当温度升到当温度升到150150左右时，保持此左右时，保持此温度温度3 34h4h由于干热灭菌温度较由于干热灭菌温度较高，操作时要注意防止烫伤高，操作时要注意防止烫伤降温降温关掉电源，自动降温关掉电源，自动降温开箱取物开箱取物等温度降到等温度降到70以下后，打开箱门，以下后，打开箱门，取出灭菌物品注意温度未降到取出灭菌物品注意温度未降到70以前，切勿打开箱门，以免玻以前，切勿打开箱门，以免玻璃器皿炸裂璃器皿炸裂c c、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌121121，100kPa100kPa，15-3015-30分分钟用于培养基、无菌水培养基、无菌水等的灭菌等的灭菌 ，所用设备是，所用设备是高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅操作方法及注意事项：操作方法及注意事项：首先将内层灭菌桶取出，再向外首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架平齐。

三角搁架平齐放回灭菌桶，并装入待灭菌物品放回灭菌桶，并装入待灭菌物品注意不要装得太挤，以免妨碍蒸注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果锥形瓶汽流通而影响灭菌效果锥形瓶与试管口不要与桶壁接触，以免与试管口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入棉塞加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内拧紧固定盖子的螺栓，注桶的排气槽内拧紧固定盖子的螺栓，注意要同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松意要同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，不漏气紧一致，不漏气加热灭菌锅，打开排气阀，使水沸腾，排加热灭菌锅，打开排气阀，使水沸腾，排除锅内的冷空气等冷空气完全排尽后关除锅内的冷空气等冷空气完全排尽后关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐步上升当锅内压力升到所需压力时，而逐步上升当锅内压力升到所需压力时，控制热源，按照灭菌所要求的时间，维持控制热源，按照灭菌所要求的时间，维持压力到灭菌时间后，切断热源，让灭菌锅内温到灭菌时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到零时，度自然下降，当压力表的压力降到零时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。

如果提前打开排气阀，锅内压灭菌物品如果提前打开排气阀，锅内压力突然下降，灭菌容器内的液体会冲出容力突然下降，灭菌容器内的液体会冲出容器，造成污染器，造成污染紫外线灭菌、紫外线灭菌以面积为以面积为10的普通小型接种室为例，在工作台上方的普通小型接种室为例，在工作台上方距地面处悬挂距地面处悬挂1 12 2只只30W30W紫外灯，每次开灯照射紫外灯，每次开灯照射30min30min，就能达到室内空气灭菌的目的照射前，适，就能达到室内空气灭菌的目的照射前，适量喷洒石炭酸等化学抑制剂，可以加强灭菌效果量喷洒石炭酸等化学抑制剂，可以加强灭菌效果适用范围：适用范围：紫外线只适用于表面灭菌和空气灭菌紫外线只适用于表面灭菌和空气灭菌操作方法：操作方法：1、下列操作与消毒灭菌无关的是 A接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦拭双手B接种前用火焰灼烧接种环(针)C培养基在50左右时搁置斜面D接种时在酒精灯的火焰旁完成课堂练习课堂练习2、采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀灭哪些部位的杂菌 A接种环、吸管、培养基、接种室B吸管、接种环、培养基、接种箱C培养基、接种环、吸管、接种箱D培养皿、吸管、培养基、双手。