药物定量分析与分析方法验证1ppt课件

药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证 一、掌握定量分析方法验证的效能目的二、熟习定量分析样品的前处置方法三、了解定量分析样品的前处置方法的进展 及在药物分中的运用根本要求根本要求第一节第一节 定量分析样品的前处置方法定量分析样品的前处置方法第二节第二节 定量分析方法特点定量分析方法特点第三节第三节 药质量量规范分析方法验证药质量量规范分析方法验证第四节第四节 生物样品分析方法的根本要求生物样品分析方法的根本要求主要内容主要内容 1.1.为什么要对定量分析的样品进展前处置？为什么要对定量分析的样品进展前处置？含卤素有机药物含卤素有机药物 R-X R-X F F，Cl,Br,I Cl,Br,I 金属有机药物金属有机药物 R-O-MeR-O-Me有机酸或酚的有机酸或酚的 含金属有机药物含金属有机药物 金属盐；结合不结实金属盐；结合不结实 有机金属药物有机金属药物 R-Me R-Me 结合结实结合结实 2.2.常用的处置方法常用的处置方法 不经有机破坏不经有机破坏的分析方法的分析方法 药物分析中常用的分析方法药物分析中常用的分析方法 经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法概述概述一直接测定法一直接测定法 例如：富马酸亚铁例如：富马酸亚铁 溶于热稀矿酸，采用铈量法溶于热稀矿酸，采用铈量法 ，邻二氮，邻二氮菲作指示剂菲作指示剂 CHCHCCOO0Fe不经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法二经水解后测定法二经水解后测定法 1.直接回流后测定法直接回流后测定法 例如：三氯叔丁醇的含例如：三氯叔丁醇的含量测定量测定 CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH (CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2O NaCl +AgNO3 AgCl +NaNO3 AgNO3 +NH4SCN AgSCN +NH4NO3 2.用硫酸水解后测定法用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含例如：硬脂酸镁的含量测定量测定 Mg(C17H35COO)2 +H2SO4 MgSO4 +2C17H35COOH H2SO4 +2NaOH Na2SO4 +2H2O 三经氧化复原后测定法三经氧化复原后测定法 1.碱性复原后测定碱性复原后测定 例如：泛影酸的含量测定例如：泛影酸的含量测定 2.酸性复原后测定酸性复原后测定 例如：碘番酸的含量测定例如：碘番酸的含量测定 Zn复原复原 后银量法后银量法 COOHIIINHCOCH3CH3CONHCOOHH2NNH2+11NaOH +3Zn+3NaI+2CH3COONa+3NaZnO2+3H2O NaI+AgNO3 AgI +NaNO3 3.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量 1含锑药物含锑药物 例如：葡萄糖酸锑的含量测定例如：葡萄糖酸锑的含量测定 Sb5+2KI Sb3+2K+I2 I2 +2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6 2含铁药物含铁药物 2Fe3+2KI 2Fe2+2K+I2 I2 +2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6H+经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法适宜对象：含金属、适宜对象：含金属、X、N、S、P等有机药物，与等有机药物，与C原子结合结实原子结合结实分类：分类：湿法破坏：主要用于含湿法破坏：主要用于含N有机药物；主要以硫酸作有机药物；主要以硫酸作为分解剂，并结合氧化剂硝酸、高氯酸、过氧为分解剂，并结合氧化剂硝酸、高氯酸、过氧化氢、高锰酸钾等化氢、高锰酸钾等干法破坏：干法破坏：凯氏定氮法原理NH2硝化生成NH4：与碱作用，经过蒸馏释放出NH3，搜集于H3BO3 溶液中 用知浓度的H2SO4或HCl规范溶液滴定，根据酸耗费的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量+244 H SO+2H2424CuSO2NH-(NH)SO 浓424322433342472(NH)SO+2NaOH2NH+2H O+Na SO2NH+4H BO(NH)B O+5H O+42472433(NH)B O+2H+5H O2NH+4H BO消解剂消解剂1.作用：缩短消解时间，防止铵盐分解。

作用：缩短消解时间，防止铵盐分解2.硫酸钾：提高硫酸沸点，以提高消解温度；硫酸钾：提高硫酸沸点，以提高消解温度；3.催化剂：汞盐、硒盐、铜盐等，其中以硫酸铜催化剂：汞盐、硒盐、铜盐等，其中以硫酸铜最常用4.对于含氮杂环构造，消解中需求参与辅助氧化对于含氮杂环构造，消解中需求参与辅助氧化剂，使分解完全并缩短消解时间，常用为剂，使分解完全并缩短消解时间，常用为30%过氧化氢和高氯酸过氧化氢和高氯酸仪器安装与操作仪器安装与操作药物药物硫酸钾硫酸钾硫酸铜硫酸铜硫酸硫酸药物药物硫酸钾硫酸钾硫酸铜硫酸铜硫酸硫酸2%硼酸硼酸甲基红甲基红-溴甲酚氯溴甲酚氯40%NaOH锌粒锌粒半微量法www1.gdou.edu/spxy/foodanalysis/swf/mnsy06.swf本卷须知样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上万一沾附可用少量水冲下，以样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低免被检样消化不完全，结果偏低消化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，渐渐参与消化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，渐渐参与30%过氧过氧化氢化氢H2O22-3ml，促使氧化。

促使氧化在整个消化过程中不要用强火坚持和缓沸腾，使火力集中在凯氏瓶在整个消化过程中不要用强火坚持和缓沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失如硫酸短少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会构成硫酸氢钾，如硫酸短少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会构成硫酸氢钾，而不与氨作用因此，当硫酸过多的被耗费或样品中脂肪含量过高时，而不与氨作用因此，当硫酸过多的被耗费或样品中脂肪含量过高时，要添加硫酸的量要添加硫酸的量参与硫酸钾的作用为添加溶液的沸点，硫酸铜为催化剂，硫酸铜在蒸参与硫酸钾的作用为添加溶液的沸点，硫酸铜为催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反响的指示剂馏时作碱性反响的指示剂混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色假设没有溴甲酚绿，可单独运用中呈红色假设没有溴甲酚绿，可单独运用0.1%甲基红乙醇溶液甲基红乙醇溶液氨能否完全蒸馏出来，可用氨能否完全蒸馏出来，可用PH试纸试馏出液能否为碱性试纸试馏出液能否为碱性干法破坏1.适用范围：主要用于含适用范围：主要用于含X、S、P等有机药物，也等有机药物，也用于含硒和砷盐的检查用于含硒和砷盐的检查2.分类：分类：3.1高温炽灼法：高温炽灼法：4.高温灼烧灰化转变成无机元素或盐；高温灼烧灰化转变成无机元素或盐；5.主要用于：含主要用于：含X、P和砷盐检查和砷盐检查6.2氧瓶熄灭法氧瓶熄灭法高温炽灼法高温炽灼法药物类型药物类型辅助添加物辅助添加物促进灰化促进灰化检查方法检查方法-I无水碳酸钠无水碳酸钠紫色碘蒸气紫色碘蒸气F、Br、Cl无水碳酸钠或钾无水碳酸钠或钾卤素鉴别卤素鉴别P氧化锌氧化锌钼蓝比色法钼蓝比色法砷盐砷盐无水碳酸钠无水碳酸钠砷盐检查法砷盐检查法原理：将待测元素有机药物在密闭的熄灭瓶中充分熄灭，原理：将待测元素有机药物在密闭的熄灭瓶中充分熄灭，彻底分解成彻底分解成CO2和水，而待测元素转化成不同价态的氧和水，而待测元素转化成不同价态的氧化物或无氧酸，被适当吸收液吸收后采用适宜方法化物或无氧酸，被适当吸收液吸收后采用适宜方法分析。

分析仪器安装：仪器安装：500ml,1000ml,2000ml,磨口、硬质玻璃锥磨口、硬质玻璃锥形瓶形瓶吸收液的选择：用于吸收液的选择：用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测等的鉴别、检查、含量测定时多数是定时多数是H2O或或H2O-NaOH；少数为；少数为H2O-NaOH-H2O2氧燃瓶熄灭法氧燃瓶熄灭法吸收液的选择吸收液的选择药物类型药物类型熄灭产物熄灭产物吸收液吸收液检查方法检查方法FHFH2O茜素氟蓝比色茜素氟蓝比色ClHClH2O-NaOH银量法银量法BrBr2、HBrH2O-NaOHH2SO3银量法银量法IH2O-NaOHH2SO3碘量法碘量法SSO3H2O浓浓H2O2沉淀法沉淀法PP2O5H2O少量硝酸少量硝酸钼蓝比色法钼蓝比色法运用例如：碘苯酯的测定运用例如：碘苯酯的测定ICHCH3(CH2)8-COOC2H5I2O2(I)_I2+2NaOH NaIO+NaI+H2O 3NaIO NaIO3+2NaI 3Br2+I +3H2O IO3+6HBrBr2(guo)+HCOOH HBr+CO2 IO3+5I+6H 3I2+3H2OI2+2Na2S2O3 2NaI+Na2S4O6CH3COOH-+-定量分析方法特点定量分析方法特点 一、容量分析法一、容量分析法 一容量分析法的特点一容量分析法的特点 操作简单、快速；操作简单、快速；比较准确比较准确RSDRSD0.2%0.2%；仪器普通易得。

仪器普通易得二容量分析法的计算问题二容量分析法的计算问题 1.1.滴定度滴定度T T的概念的概念 每每1ml1ml规定浓度的滴定规定浓度的滴定液相当于被测物质的量液相当于被测物质的量(mg)(mg)2.2.滴定度的计算滴定度的计算 aA+bB cC+dD aA+bB cC+dD T=M T=Mb/ab/aB B 3.3.百分含量的计算百分含量的计算 1 1直接滴定法直接滴定法 D%=V D%=V F F T/W T/W 100%100%F=F=实践标定的浓度实践标定的浓度/规定的浓度规定的浓度 2 2间接滴定法回滴定法；剩余滴定法间接滴定法回滴定法；剩余滴定法 D%=D%=VO VB)VO VB)F F T/W T/W 100%100%二、光谱分析法二、光谱分析法 一紫外一紫外-可见分光光度法可见分光光度法200nm200nm760nm)760nm)灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-10-4g/ml 4g/ml 10-7g/ml 10-7g/ml 1.1.特点特点 准确度高，准确度高，SRDSRD%为为2%2%5%5%仪器价钱低廉，操作简单，易普及，运用仪器价钱低廉，操作简单，易普及，运用 范围广。

范围广2.2.比耳比耳-朗伯定律朗伯定律 A=ECL E1%1cm=A=ECL E1%1cm=10/M10/M 3.3.仪器校正和检定仪器校正和检定 波长校正用汞灯中较强谱线波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73,237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与与576.96nm576.96nm 或用仪器中氘灯的或用仪器中氘灯的486.02nm486.02nm与与656.10nm656.10nm进展进展校正吸收度的检定：用吸收度的检定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至液至1000ml1000ml 波长波长(nm)235(nm)235(最小最小)257()257(最大最大)313()313(最最小小)350()350(最大最大)E1%1cm 124.5 144.0 48.62 E1%1cm 124.5 144.0 48.62 106.6106.6 杂散光检查：杂散光检查：试剂试剂 浓度浓度(g/ml)(g/ml)测定波测定波长长 透光率透光率(%)(%)NaI 1.00 220nm NaI 1.00 220nm 0.8 0.8 NaNO2 5.00 340nm NaNO2 5.00 340nm 0.8 0.8 4.4.对溶剂的要求对溶剂的要求:220 220240nm 241240nm 241250nm 251250nm 251300nm 300nm 300nm300nm以上以上 溶剂溶剂+吸收池吸收池A A 0.41 0.41 0.20 0.20 0.10 0.10 0.050.05 5.5.测定方法测定方法 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.3 0.3 0.70.7 对照品比较法：对照品比较法：Cx=(Ax/Ar)Cr;Cx=(Ax/Ar)Cr;含量含量%=Cx%=CxD/WD/W100%100%常用方法常用方法 吸收系数法：吸收系数法：计算分光光度法：计算分光光度法：二荧光分光光度法二荧光分光光度法 灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-10-10g/ml 10g/ml 10-12g/ml 10-12g/ml 在低浓度进展测定，防在低浓度进展测定，防止止F F与与C C不成正比及自熄灭作用不成正比及自熄灭作用 1.1.特点特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减防止样品液荧光衰减 灵敏度高，但干扰要素灵敏度高，但干扰要素多。

多制备荧光衍生物，可提制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性高其灵敏度和选择性用样品量少，操作简单，方法快速，用样品量少，操作简单，方法快速，运用范围较广运用范围较广2.荧光分析仪荧光分析仪 有二个单色光器有二个单色光器激发单色光器与发射单色光激发单色光器与发射单色光 器；且激发光源、样品池和检测器成直角器；且激发光源、样品池和检测器成直角3.含量测定含量测定 常用的方法对照品比较法常用的方法对照品比较法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)Cr Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片三、色谱分析法三、色谱分析法 按分别原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分别原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 方法分类方法分类 按分别方法分为：按分别方法分为：PC；TLC；柱色谱；柱色谱；GC；HPLC 一一HPLC法法 1.对对HPLC仪器普通要求仪器普通要求 色谱柱、流动相按种类项下要求色谱柱、流动相按种类项下要求色谱柱的实际板数：色谱柱的实际板数：n=5.54(tR/Wh/2)2 2.系统性实验系统性实验 分别度：分别度：R=2tR1 tR2)/(W1+W2);要大于要大于1.5 拖尾因子：拖尾因子：T=W0.05h/2d1 应在应在0.9 1.05 重现性：重现性：内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法测定方法 规范曲线法规范曲线法 外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法外标一点法 运用例如：运用例如：RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用规范曲线法法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用规范曲线法 如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法 二二GC法法 1.对对GC仪器普通要求仪器普通要求 载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱 色谱柱的实际板数：色谱柱的实际板数：n=5.54(tR/Wh/2)2 2.系统性实验系统性实验 分别度：分别度：R=2tR1 tR2)/(W1+W2);要大于要大于1.5 拖尾因子：拖尾因子：T=W0.05h/2d1 应在应在0.9 1.05 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 3.测定方法测定方法 规范曲线法规范曲线法 外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法外标一点法 运用例如：运用例如：Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注及其片剂、注 射剂、甲酚皂溶液等均采用射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正法中的内标法加校正 因子测定含量。

因子测定含量一、准确度一、准确度 是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示用回收率表示一含量测定方法的准确度一含量测定方法的准确度 1.原料药原料药 可用知纯度对照品或样品进展测定；可用知纯度对照品或样品进展测定；或与已建准确度的另一方法测定的结果进展比较或与已建准确度的另一方法测定的结果进展比较2.制剂制剂 要调查辅料对回收率的影响采用在空要调查辅料对回收率的影响采用在空白辅料中参与原料对照品的方法作回收率实验，然白辅料中参与原料对照品的方法作回收率实验，然后计算后计算RSD药质量量规范分析方法验证药质量量规范分析方法验证空白回收率空白回收率 空白空白+知量知量A的对照品或规范品测定，测定值的对照品或规范品测定，测定值为为M 加样回收率加样回收率 已准确测定药物含量已准确测定药物含量P的真实样品的真实样品+知量知量A的对照的对照品或规范品测定，测定值为品或规范品测定，测定值为M%100AMR%100APMR二数据要求二数据要求 回收率回收率%=测定值测定值-空白值空白值/参与量参与量100%详细做法：测定高、中、低三个浓度，详细做法：测定高、中、低三个浓度，n=3,共共9个数据来评价回收率的个数据来评价回收率的RSD3%；用；用UV和和HPLC法时，普通回收率要求法时，普通回收率要求95%105%二、精细度二、精细度 是指在规定的测试条件下，同一个均是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果之间的接近程度。

匀样品，经多次测定结果之间的接近程度一精细度表示方法一精细度表示方法 1.偏向偏向(deviation,d)2.规范偏向规范偏向standard deviation,SD或或S 3.相对规范差相对规范差(relative standard deviation,RSD)也称变异系数也称变异系数(coefficient of variation,CV)xxdi12nxxSi%100 xSRSD二反复性、中间精细度及重现性二反复性、中间精细度及重现性 1.反复性反复性 在一样条件下在一样条件下,由一个分析人员测定所得结果的精细度由一个分析人员测定所得结果的精细度.2.中间精细度中间精细度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备测定结果的精细度同设备测定结果的精细度3.重现性重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精细度在不同实验室由不同分析人员测定结果的精细度三数据要求三数据要求 应报告应报告S或或SD、RSD和可信限用统计和可信限用统计学的可信性分析学的可信性分析(t或或f三、专属性三、专属性 是指在其他成分是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等如杂质、降解产物、辅料等)能够能够存在下，存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。

鉴别反响、采用的方法能准确测定出被测物的特性鉴别反响、杂质检杂质检 查、含量测定方法，均应调查其专属性查、含量测定方法，均应调查其专属性一鉴别反响一鉴别反响 应能与其它共存的物质或类似化合物区分，不含被应能与其它共存的物质或类似化合物区分，不含被测组分测组分 的样品均应呈现负反响的样品均应呈现负反响二含量测定和杂质测定二含量测定和杂质测定 色谱法和其他分别法，应附代表性的图谱，色谱法和其他分别法，应附代表性的图谱，以阐明专属性以阐明专属性图中应注明各组分的位置，色谱法中分别度应符图中应注明各组分的位置，色谱法中分别度应符合要求在能合要求在能 获得杂质的情况下，可加到试样中，调查对结果获得杂质的情况下，可加到试样中，调查对结果的干扰在杂的干扰在杂 质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方法进和药典方法进 行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方法四、检测限四、检测限limit of detection,LOD)是指试样中被测物能被检测出的是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限制检验目的。

它无最低浓度或量，是限制检验目的它无需测定，只需指出高于或低于该规定的需测定，只需指出高于或低于该规定的浓度或量即可浓度或量即可五、定量限五、定量限limit of quantitation,LOQ)是指样品中被测物能被定量测定是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度的最低量，其测定结果应具一定准确度和精细度杂质和降解产物进展定量测和精细度杂质和降解产物进展定量测定时，要求定时，要求LOQ.常用信噪比法确定定量常用信噪比法确定定量限，普通以限，普通以S/N=10时相应的浓度进展测时相应的浓度进展测定六、线性六、线性 是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度浓度直接呈正比关系的程度UV法：首先制备规范系列，浓度点法：首先制备规范系列，浓度点n=5;A=0.30.7 建立回归方程建立回归方程C=aA+b;r 0.9999HPLC法：制备一个规范系列，浓度点法：制备一个规范系列，浓度点n=5 7;以以C对对h或或A或与内标物的峰面积之比，建立回归方程或与内标物的峰面积之比，建立回归方程r 0.999七、范围七、范围 是指到达一定精细度、准确度和是指到达一定精细度、准确度和线性、测试方法线性、测试方法适用的高低限制或量的区间。

适用的高低限制或量的区间原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的80%120%制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的70%-130%溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限制的溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限制的20%八、耐用性八、耐用性 是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的接受程度典型的变动要素有：被溶液的稳影响的接受程度典型的变动要素有：被溶液的稳定性、样品提取次数、时间等定性、样品提取次数、时间等HPLC法变动要素有：流动相组成与法变动要素有：流动相组成与pH，色谱，色谱柱，柱温，流速等柱，柱温，流速等GC法变动要素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、法变动要素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检测器温度等进样口和检测器温度等分析方法效能目的的详细运用：分析方法效能目的的详细运用：1.用于鉴别实验的方法：只需求专属性、耐用性，其他不要求用于鉴别实验的方法：只需求专属性、耐用性，其他不要求2.用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：用于定量：除了检测限不要求外，其他七项目的均要求。

用于定量：除了检测限不要求外，其他七项目的均要求限制检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其他不要求限制检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其他不要求3.原料、制剂及溶出度测定：不要求检测和定量限，其他均要求原料、制剂及溶出度测定：不要求检测和定量限，其他均要求一、常用样品的种类、采集和贮藏一、常用样品的种类、采集和贮藏 二、生物样品分析前处置技术二、生物样品分析前处置技术 三、定量分析方法验证三、定量分析方法验证 生物样品分析方法的根本要求生物样品分析方法的根本要求1.血样血样血浆：加抗凝剂，凝固后离心血浆：加抗凝剂，凝固后离心血清：放置凝固血清：放置凝固全血：加抗凝剂混合，不离心全血：加抗凝剂混合，不离心贮藏条件：冰箱冷藏或冷冻贮藏条件：冰箱冷藏或冷冻-70度度2.唾液唾液加碱除去黏液，降低粘度加碱除去黏液，降低粘度3.尿样尿样留意饮食对尿样的影响；留意饮食对尿样的影响；立刻测定，否那么参与防腐剂贮藏立刻测定，否那么参与防腐剂贮藏 一、常用样品的种类、采集和贮藏一、常用样品的种类、采集和贮藏 二、生物样品分析前处置技术二、生物样品分析前处置技术1.除去蛋白质除去蛋白质有机溶剂沉淀法：有机溶剂沉淀法：1:3中性盐沉淀法：硫酸铵、硫酸钠、磷酸盐中性盐沉淀法：硫酸铵、硫酸钠、磷酸盐参与强酸：参与强酸：pH低于等电点低于等电点铜盐或锌盐沉淀法：高于等电点铜盐或锌盐沉淀法：高于等电点酶解法：酶解法：2.结合物的水解结合物的水解酸水解或酶水解酸水解或酶水解3.有机破坏有机破坏结合结实的金属离子结合结实的金属离子4.分别、纯化与富集分别、纯化与富集液液-液萃取：有机溶剂液萃取：有机溶剂1-2:1，留意，留意pH值对萃取的影值对萃取的影响响液液-固萃取：乳化少、萃取效率高，填料：正相硅固萃取：乳化少、萃取效率高，填料：正相硅藻土和反相活性炭、藻土和反相活性炭、C18组分富集：减少萃取体积、组分富集：减少萃取体积、样品浓缩、柱切换技术样品浓缩、柱切换技术 三、定量分析方法验证三、定量分析方法验证 1.特异性特异性是原物质、无干扰是原物质、无干扰2.规范曲线和线性范围规范曲线和线性范围3.精细度：批内精细度：批内15%，批间，批间20%4.准确度：准确度：85-1155.定量下限：定量下限：6.样品稳定性：样品稳定性：7.提取回收率：由于多了提取处置提取回收率：由于多了提取处置思索题思索题1.测定方法的效能目的包括哪些？测定方法的效能目的包括哪些？2.精细度表示方法有哪些？精细度表示方法有哪些？3.什么是准确度？怎样测定什么是准确度？怎样测定。