菌种活化方法

低温保存管（cryo tube）中之一般菌种临时存放及活化A. 低温保存管之临时存放及解冻1. 低温保存管（cryo tube）应存放于一 20°C ~ —80°C之低温条件下2. 准备37C之70%（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以 火加温，以免危险；若以37C水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先 安放小试管架（可放置cryotube之大小），液面不可高达管塞3. 将cryotube从低温保存条件中取出，置于37C浴槽之小试管架上4. 不断轻微摇动cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需2分 钟）B. 菌株活化：在无菌操作下1. 用无菌微量吸管，从已溶解之cryotube吸取50 ?1 （或1~2滴）之菌液， 滴入固态指定培养基（培养基编号及温度示于菌株订购单）某一边缘附近，以划线 法接种于培养基2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养C. 划线法1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约5公分）烧至火红，并不断来回 烧烤金属固定杆之前约10公分，等待约10秒钟，将接种环前端轻触培养基边 缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向 中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖1/3培养基为止（I区）。

2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自I区涂布的边缘再横划数条线到 未接种的区域（II区）3. 重复2.的动作完成III区与IV区4. 灼烧接种环，将接种环归位D. 图示（1）金属接种环(2)平板划线法菌寄冷冻干燥管之开管说明下列步骤请在无菌环境下操作：1、 以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端2、 滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端3、 取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞4、 ( a )适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡(可 用该吸管协助)，直到均匀悬浮b )适用于霉菌、酵母菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无 菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30 至60分钟5、 取0.1-0.2ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成 一系列之稀释，用无菌1型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩 余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之6、 某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期(lag period )较长，必须等培养 二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养(Subculture)后才能正常生 长。

经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化7、 若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问 题菌株反应单传真至本中心，即进行处理8. 未开封之冷冻干燥管，请冷藏于4°C冰箱，切勿冷冻保存如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合!。