《发酵工程实验报告》PPT课件.ppt

1.复 习 酶 活 力 的 测 定 方 法 2. 鉴 定 摇 瓶 发 酵 的 黑 曲 霉 的 产 酶 能 力 植 酸 酶 活 性 单 位 ： 样 品 在 植 酸 钠 浓 度 为5.0mol/L,温 度 37 ， PH5.5的 条 件 下 ， 每分 钟 从 植 酸 钠 中 释 放 1umol无 机 磷 ， 即 为 1个 植 酸 酶 活 性 单 位 在 酸 性 溶 液 中 正 磷 酸 与 钼 酸 作 用 生 成 磷 钼酸 ， 后 者 当 有 还 原 剂 （ 如 Vc） 存 在 时 ， 立即 转 化 为 蓝 色 还 原 物 质 ， 其 最 大 吸 收 在660nm处 1.乙 酸 缓 冲 液 2.植 酸 钠 溶 液 3.10%TAC 4.2.5%钼 酸 钠 5.10%Vc 6.17%硫 酸 7.硫 酸 二 氢 钾 （ 标 准 磷 液 ） 8.显 色 液 ：（ 17%硫 酸 ） ： （ 水 ） ： （ 2.5%钼 酸 钠 ） ：（ 10%Vc） =1： 2： 1： 1 1.先 将 实 验 所 需 溶 液 按 相 应 浓 度 配 置 好 （ 1） 按 表 稀 释 磷 溶 液试 管 号 1 2 3 4 5 6标 准 P液 /ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1蒸 馏 水 /ml 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0相 当 无 机 磷 /ug 0 2 4 6 8 10显 色 液 /ml 3 3 3 3 3 3 将 装 好 的 溶 液 摇 匀 ， 放在 37 水 浴 锅 中 持 续20min,冷 却 。

在 波 长 为 660nm处 测 吸 光 值 以 无 机 磷 为 横 坐 标 ， 吸 光 度 为 纵 坐 标 ， 绘 制 标 准 曲 线 （ 1） 酶 液 制 备 ： 摇 瓶 液 为 试 样 ， 在 离 心 机 中以 3000r/min转 速 离 心 15min， 取 清 液 反 应 顺 序 样 品 1 样 品 2 样 品 3 样 品 空 白1.加 酶 液 /ml 0.3 0.3 0.3 0.32.加 植 酸 钠 /ml 0.9 0.9 0.9 0.9(TCA)3.加 乙 酸 缓 冲 液/ml 0.9 0.9 0.9 0.94.混 匀 5.37 水 解30min 6.依 次 加 入TCA/ml 0.9 0.9 0.9 0.9(植 酸 钠 ） 7.加 显 色 液 /ml 3 3 3 38.37 水 浴 显 色/min 20 20 20 209.测 OD值 0 1.568 3.159 0.286 1.取 吸 光 度 OD=3.159， 将 其 替 换 为 标 准 直 线中 的 y=1.0579x-0.1094中 的 y值 ， 得 到x=3.0895， 此 值 即 为 无 机 磷 的 质 量 。

2.由 酶 活 的 计 算 方 法 酶 活 =F m/30 31 V 其 中 V=0.3ml,F=1, 所 以 得 到 植 酸 酶 酶 活 =11.07U/L 。