斑马鱼胆固醇C酶联免疫分析

精品资料，欢迎大家下载！斑马鱼胆固醇〔C〕酶联免疫分析试剂盒操作方法本试剂盒仅供研究使用.检测范围：48T0.3nmol/L-9nmol/L使用目de：本试剂盒用于测定斑马鱼血清、血浆及相关液体样本中胆固醇〔C〕含量.实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼胆固醇〔C〕水平.用纯化de斑马鱼胆固醇〔C〕抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗de微孔中依次参加胆固醇〔C〕,再与HRP标记de胆固醇〔C〕抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶de催化下转化成蓝色,并在酸de作用下转化成最终de黄色.颜色de深浅和样品中de胆固醇〔C〕呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度〔OD值〕,通过标准曲线计算样品中斑马鱼胆固醇〔C〕浓度.试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlx1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品〔16nmol/L〕0.5mlX1瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlX1瓶4样品稀释液6mlx1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlx1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlx1/瓶12密封袋1个标本要求标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验.假设不能马上进行试验,可将标本放于-20C保存,但应防止反复冻融1. 不能检测含NaN3de样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶de〔HRP〕活性.操作步骤标准品de稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可根据以下图表在小试管中进行稀释.8nmol/L5号标准品150Ude原倍标准品参加150pl标准品稀释液4nmol/L4号标准品150Ude5号标准品参加150标准品稀释液2nmol/L3号标准品150Ude4号标准品参加150标准品稀释液1nmol/L2号标准品150Ude3号标准品参加150标准品稀释液0.5nmol/L1号标准品150Ude2号标准品参加150标准品稀释液1. 加样：分别设空白孔〔空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同〕、标准孔、待测样品孔.在酶标包被板上标准品准确加样50此待测样品孔中先加样品稀释液40此然后再加待测样品10U〔样品最终稀释度为5倍〕.加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.2. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟.3. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干.4. 加酶：每孔参加酶标试剂504,空白孔除外.5. 温育：操作同3.6. 洗涤：操作同5.7. 显色：每孔先参加显色剂A504,再参加显色剂B50U,轻轻震荡混匀,37C避光显色15分钟.8. 终止：每孔加终止液50山终止反响〔此时蓝色立转黄色〕.9. 测定：以空白空调零,450nm波长依序测量各孔de吸光度〔OD值〕.测定应在加终止液后15分钟以内进行.操作程序总结：准备试剂,样品和标准品参加准备好de样品和标准品,37C反响30分钟以上资料仅供参考，如有侵权，留言第一时间删除！洗板5次,参加酶标试剂.37C反响3.分钟洗板5次,参加显色液A,B,37C显色10分钟参加终止液SZ15分钟之内读0D值计算计算以标准物de浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品deOD值由标准曲线查出相应de浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物de浓度与OD值计算出标准曲线de直线回归方程式,将样品deOD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品de实际浓度.1. 考前须知试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟前方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存.2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果.3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以防止试验误差.一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样.4. 请每次测定de同时做标准曲线,最好做复孔.如标本中待测物质含量过高〔样本OD值大于标准品孔第一孔deOD值〕,请先用样品稀释液稀释一定倍数〔n倍〕后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数〔XnX5〕.5. 封板膜只限一次性使用,以防止交叉污染.6. 底物请避光保存.7. 严格根据说明书de操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准^所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.8. 本试剂不同批号组分不得混用.9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准.保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8C.2.有效期：6个月。