体外诊断试剂解析告性能评估系列指导原则

word附件：《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原如此〔征求意见稿〕》目 录――编制说明——检测限——线性X围——可报告X围——准确度〔回收实验〕——准确度〔方法学比对〕——精细度——干扰实验——稳定性——参考值〔参考区间〕附件1：体外诊断试剂分析性能评估指导原如此 编制说明 《体外诊断试剂注册管理方法〔试行〕》颁布后，体外诊断试剂产品的注册过程中要求提供申报产品的分析性能评估资料，产品性能评估是产品研发、制定产品标准等过程的重要技术支持研究过程，并可能对产品的质量造成一定的影响 目前国际上对体外诊断试剂的性能评估通常是以美国临床实验室标准化组织〔Clinical and Laboratory Standards Institude以下称为CLSI〕的相关标准为依据，也是美国FDA推荐采用的评价标准，但我国还没有相关的标准与指导原如此的要求为进一步明确体外诊断试剂分析性能评估的技术要求，我中心组织有关专家起草产品分析性能评估指导原如此，以明确体外诊断试剂产品性能评估的技术要求体外诊断试剂产品性能评估包括检测限、线性X围、可报告X围、准确度〔回收实验〕、准确度〔方法学比拟〕、精细度、干扰实验、稳定性、参考区间共九个项目。

起草的主要依据CLSI发布的以下标准:1. C28-A2: How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory; Approved Guideline-Second Edition. 2. EP5-A: Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices; Approved Guideline.3. EP6-A: Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures; A Statistical Approach; Approved Guideline.4. EP7-A: Interference testing in clinical chemistry; Approved Guideline.5. EP9-A2: Method parison and bias estimation using patient samples; Approved Guideline-Second Edition.每项性能的主要研究方法均采用以上标准和国内实际采用的评价方法相结合的方法。

我中心对于专家起草的指导原如此的初稿进展了适当的文字调整，之后将分析性能评估指导原如此发给十位相关专业的专家征求意见意见返回后我们对专家的回复意见进展了整理，对有些意见进展了采纳，有些意见暂时没有采纳采纳的意见，如：线性X围中的“〞的描述采用专家意见将公式的书写进展了文字更改，与CLSI文件一致；“〞中的Y的均描述由Yave改为；还有一些文字性错误也进展了修改有一些专家意见因为对一些概念还存在分歧，因此暂时未采纳，待经过专家讨论会后再进展确定如“检测限评估〞中的检测方法“连续测定20次，计算均值加2SD的方法缺少依据，建议采用可报告X围评估下限所提供的方法〞；“建议将批内/批间精细度〞改为“分析内/分析间精细度〞；“精细度是用变异系数表示还是用置信区间表示〞；参考值：“结果分析中应首先验证是否为正态分布，对于正态分布，如此应根据临床应用目采用均值±2SD或均值±3SD，对于偏态分布如此应选择单侧95％分位数或双侧2.5％-97.5％分位数〞由于一些概念在学术界还存在分歧，因此我们会通过上网征求意见和专家会的形式进展讨论，找到最理想、最适合企业与我国国情又能保证产品质量的评价方法附件2体外诊断试剂分析性能评估指导原如此——检测限〔征求意见稿〕一、概述检测限〔limit of detection〕是指检测方法可检测出的最低被测量浓度，也称检测低限〔lower limit of detection〕或最小检出浓度〔minimum detectable concentration〕，有时也称为分析灵敏度〔analytical sensitivity〕。

检测限评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一本指南基于国家食品药品监视管理局《体外诊断试剂注册管理方法〔试行〕》〔以下简称《方法》〕的有关要求，参考CLSI有关标准，对定量检测方法检测限的评估方法和数据处理方法进展了要求其目的是为生产企业进展定量检测方法检测限评估提供原如此性指导，也为注册管理部门审核该局部分析性能评估资料提供技术参考同时，本指南亦可指导临床实验室进展定量检测方法检测限评估由于体外诊断试剂产品开展速度快、专业跨度大，国家食品药品监视管理局将根据体外诊断试剂开展的需要，适时对本指南进展修订二、 检测限评估的根本原如此1. 实验人员应熟悉检测方法与仪器操作；2. 采用适宜的校准品、质控品并保持仪器处于正常状态；3. 用于实验的试剂应为同一批号，且在有效期内三、 检测限的评估和数据处理方法1. 实验材料和根本要求空白样本的制备：空白样本应不含被测物，但其基质应与待测定常规样本一样如空白样本难以得到，可采用5%牛血清或人血清白蛋白溶液或根据测定项目选用相应基质的样本，但应注意将基质效应减至最小2. 实验方法在一次运行中将空白样本重复测定20次。

3. 数据处理（1） 数据记录：将测定结果记录于表格中如果检测系统对于低于零的结果报告为零，应记录初始响应值，如吸光度值等2） 数据统计：计算20次结果的均值与标准差SD4. 结果报告：以空白均值加两倍标准差报告方法的检测限〔+2SD〕附件3体外诊断试剂分析性能评估指导原如此——线性X围〔征求意见稿〕 一、概述线性X围评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一本指南基于国家食品药品监视管理局《体外诊断试剂注册管理方法〔试行〕》、《中华人民某某国卫生行业标准---定量测定方法的线性评价》的有关要求，参考CLSI有关标准，对定量检测方法中线性X围的评估方法和数据处理方法进展了原如此性要求其目的是为生产企业进展线性X围评估与准备线性X围评估资料提供原如此性指导，也为注册管理部门审核该局部分析性能评估资料提供技术参考同时，本指南亦可指导临床实验室建立定量测定方法的线性X围或对标称的线性参数进展验证由于体外诊断试剂产品开展速度快、专业跨度大，国家食品药品监视管理局将根据体外诊断试剂开展的需要，适时对本指南进展修订二、线性X围评估的根本原如此〔1〕实验操作人员应熟悉方法原理与操作，能对样本进展正确处理，确保仪器工作状态正常，采用适当的校准品对仪器进展校准。

〔2〕仪器的各项性能指标〔如精细度〕应与标称值相符，不存在明显的携带污染等〔3〕应使用同批号试剂与校准品三、线性X围的评估与数据处理方法1.1 根本要求〔1〕样本基质应与临床实验样本相似，但不可采用含有对测定方法具有明确干扰作用物质的样本，如溶血、脂血、黄疸或含有某些特定药物的样本进展血清学标志物检测时，理想的样本为分析物浓度接近预期测定上限的混合人血清〔2〕建立一种定量测定方法的线性X围时，需在预期测定X围内选择7-11个浓度水平如将预期测定X围加宽至130%，在此X围内选择更多的浓度水平，然后依据实验结果逐渐减少数据点直至表现出线性关系，可发现最宽的线性X围〔3〕当对标称线性参数进展验证时，需在线性X围内选择5-7个浓度水平〔4〕无论是建立或验证线性X围，所选用的浓度水平应可覆盖整个预期测定X围并包括与临床有关的重要评价浓度，如最小测定浓度或线性X围的最低限、不同的医学决定水平、最大测定浓度或线性X围的高限等1.2 制备方法〔1〕不同浓度水平的样本可通过将高浓度样本与低浓度样本进展倍比稀释得到，注意在进展液体吸取时应选择精细度与准确性好的移液装置制备时应将样本完全混合并防止蒸发或其他使样本变质的情况。

每份样本的浓度与体积单位应统一〔2〕如果高/低浓度血清的值未知，可将每种血清编码，用编码代表每个血清的相对浓度对于等浓度间隔样本，可用连续整数〔如1、2、3、4、5〕代表连续样本进展数据处理时可用样本号代替X值表1和表2中描述的样本制备过程是按照等浓度间隔的设计进展的，每个浓度水平的样本量为1.00ml制备非等浓度间隔的样本时应明确各样本间的浓度关系，测定时可以这些样本间的相对浓度比值做为X值表1：11个浓度水平的样本制备样本号123456低浓度血清(ml)高浓度血清(ml)样本号7891011低浓度血清(ml)高浓度血清(ml)表2：5个浓度水平的样本制备样本号12345低浓度血清(ml)高浓度血清(ml)〔3〕样本的特殊处理：在无法得到适用的人血清时，需对样本进展一些特殊处理以满足实验要求这些处理过程包括稀释、参加添加物或透析、热处理等，无论进展何种处理均应以保持基质恒定为根本原如此在评价报告中应对所使用的稀释液、添加物、溶剂等的材料来源加以注明样本稀释液应选用由厂家推荐或经实验室证明可使用的产品，如可采用5%牛血清白蛋白或人白蛋白溶液欲提高样本浓度时可在样本中添加分析物纯品在添加物为溶液状态时，应注意添加液体对样本的稀释作用〔小于10%〕并注明所用溶剂。

2．实验过程2.1 建立线性X围：需测定9-11个浓度水平，每个浓度水平重复测定3-4次2.2 验证标称线性参数：需测定4-6个浓度水平，每个浓度水平重复测定3-4次2.3 所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定，最好在一天之内完成3.1 数据记录〔1〕可参考表3进展数据记录〔2〕可采用其它形式进展记录，但应注意保存原始数据表3：线性评价数据记录表〔11个浓度水平，重复测定4次〕项目：样品：仪器：试剂/批号：校准品/批号：操 审核者：测定日期：样本号测定1测定2测定3测定4均值12345678910113.2 数据可用性检查可通过绘制散点图对测定数据的可用性进展初步检查以样本号或样本浓度为X轴，以测定结果为Y轴做图，在图上标出针对每个样本的测定值与每个浓度水平的测定均值，手工或用计算机做图将均值点相连，观察数据点与直线间的偏差，如偏差过大，明确数据组存在明显非线性，需要对测定过程进展检查，排除因操作错误所至误差，并对样本进展重新测定如图形与直线接近，明确可对数据组继续进展统计分析3.3 剔除离群值离群值可由散点图初步判断，标准中建议采用格拉布斯〔GRUBBS〕法进展离群值检验。

检验步骤如下:每组数据中有4个测定结果，分别记为 y1，y2，y3，y41)将4个测定值按大小顺序排列,最大值记为max,最小值记为 min;(2)由4个测定值计算均值 和标准差S:=(y1+y2+y3+y4)/4；(3)根据可疑值 max或 min分别按下式计算统计量t:t1 = (max-)/S，t2 = (min-)/S;(4)根据给定的显著性水平a和重复测定次数查表得临界值;(5)如t值大于临界值，如此相应的可疑值为离群值Grubbs检验临界值(Ta)值表样本数显著性水平样本数显著性水平343.4 进展多项回归分析对数据组进展多项回归分析，得到一级、二级与三级多项式一级多项式为直线，二级多项式表示上升曲线或下降曲线，三级多项式表示S形曲线〔在测量X围两端具有明显的非线性〕多项式方程如下：级数 多项式 回归自由度〔Rdf〕一级 Y = b0 + b1X 2二级 Y = b0 + b1X + b2X2 3三级 Y = b0 + b1X + b2X2 + b3X3 4多元回归方程中以bi表示的系数为回归系数。

在二级与三级方程中，b2与b3为非线性系数对回归方程进展线性检验就是对每个非线性系数作t检验，判断回归系数与零是否有显著性差异b0与b1不反映非线性，故不需对其进展检验对b2与b3的检验方法如下：计算统计量t，计算公式为：t = bi/ SEi其中，SEi 为每个非线性系数的斜率标准误，计算公式为：S其中，Y为回归方程预测值，与为测定均值由公式df = L*R-Rdf 计算自由度，L为样本数，R为每个样本的测定次数，Rdf为回归自由度，即回归方程中系数〔包括b0〕的个数如测定5样本，每个样本重复测定4次，如此对测定数据进展回归分析后其三级多项式中L=5，R=4，Rdf=4，df=5*4-4=16在t值表中寻找t界值〔双边检验，α=0.05〕，将计算出的t值与界值比拟，如p>0.05，表示非线性系数与零无显著性差异，数据组被认为具线性，此时可对数据组进展精细度检验，具体方法见后当精细度符合线性判断要求时，数据分析可完毕如p<0.05，表示此非线性系数具有统计学显著性，数据组为非线性，此时应进展临床标准的线性与非线性检验3.6 临床标准的线性与非线性检验上述多项式回归分析主要是利用统计学方法进展线性判断，统计学标准的线性可称为一阶线性，对数据组的要求很高。

对于在临床实验室中使用的测定方法，在其临床应用实践中允许有一定的非线性误差，此时通过对统计学标准的非线性作程度判断，可得到临床标准的线性，即二阶线性临床标准的线性检验中使用了两个统计量，ADL〔偏离直线平均差异average deviation from linearity〕与PctBnd〔百分区界 percent bound〕 ，对于大多数分析物PctBnd取5%如ADL小于所要求的临界判断值，如此可认为数据组具有临床可承受的线性，所拟合出的最适非线性多项式无临床意义1） ADL值的计算：ADL表示最优拟合曲线与直线的平均差异，其计算公式如下：ADL = x 100% p(x)：最优拟合二阶或三阶方程的拟合值a+bx：拟合一阶方程的拟合值L：样本数：总平均浓度〔全部测量数据的平均值〕 = (y1+y2+y3+……+yn)/n 〔2〕将ADL与临界值比拟一般设定ADL小于5%为临床允许误差，即取PctBnd为5%，通过查表〔见附表A与B〕得到ADL临界值如ADL小于临界值，可认为多项式具有临床可承受的非线性，为二阶线性如ADL大于临界值，如此为临床不可承受的非线性3.7 对数据组进展精细度检验测量数据的精细度可直接影响多项式回归分析的结果，为提高统计成效，需对数据组进展精细度检验。

〔1〕计算最优拟合方程的回归标准误〔σ〕σ =yi: 各个测量值p(xi): 最优拟合方程的拟合值n: 样本数乘以重复次数(L x R)d: 最优拟合方程的阶数〔2〕计算不精细度用最优拟合方程的回归标准误〔σ〕与总平均浓度()的百分比代表不精细度〔3〕数据组的不精细度检验跟据以下公式进展判断：σ：最优拟合方程的回归标准误：总平均浓度L：样本数R：重复测量的次数C：常数(附表C)PctBnd:取5%不精细度满足判断式时, 说明数据的精细度好可作线性评价反之如此表示数据的精细度差，不能作线性评价当PctBnd取5%时, 尚可通过查不精细度和临界值表判断数据是否精细 (附表A和B), 如此时不精细度对应的临界值显示P, 明确测量数据的精细度不符合作线性判断的要求线性X围报告的具体格式不要求，但至少应包括以下几方面：（1） 进展线性评价的实验室或生产厂家名称2） 被评价的方法或试剂名称，批号3） 测定项目4） 线性X围〔如为二阶线性应包括临床允许误差〕5） 如可能应标出测定项目的医学决定水平与在此水平处的临床允许误差附录：表A 不精细度和ADL的临界值〔PctBnd=5%，d=1或2阶〕σ/%L*R=10L*R=12L*R=14L*R=16L*R=18L*R=20126.0 3457．0678.7(P)8.4(P)8PP8.6(P)8.3(P)8．09PPPP8.5(P)8.3(P)>9PPPPPP L*R:样本数*重复测量的次数表B 不精细度和ADL的临界值〔PctBnd=5%，d=3阶〕σ/%L*R=10L*R=12L*R=14L*R=16L*R=18L*R=20126.0 345679.0(P)8.7(P)8PP8.9(P)8.6(P)9PPPP8.9(P)8.7(P)>9PPPPPP L*R:样本数*重复测量的次数表C 不精细度界值的常数最优拟合方程的阶数精细度界值的常数〔C〕一阶或二阶三阶附件4体外诊断试剂分析性能评估指导原如此——可报告X围〔征求意见稿〕一、概述定量分析方法的可报告X围〔reportable range〕是临床实验室发出检验报告的依据之一，可报告X围包括可报告低限与可报告高限。

可报告X围评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一本指南基于国家食品药品监视管理局《体外诊断试剂注册管理方法〔试行〕》的有关要求，参考CLSI有关标准，对定量检测方法中可报告X围的评估方法和数据处理方法进展了原如此性要求其目的是为生产企业进展可报告X围评估与准备可报告X围评估资料提供原如此性指导，也为注册管理部门审核该局部分析性能评估资料提供技术参考同时，本指南亦可指导临床实验室对定量分析方法的可报告X围进展验证由于体外诊断试剂产品开展速度快、专业跨度大，国家食品药品监视管理局将根据体外诊断试剂开展的需要，适时对本指南进展修订 二、可报告X围评估的根本原如此1.实验人员应熟悉测定方法与仪器操作2.采用适宜的校准品、质控品并保持仪器处于正常状态3.用于评价实验的试剂应为同一批号，并在有效期内三、可报告X围的评估与数据处理方法1.1 样本要求最好选择与测定样本具有一样基质的样本1.2 制备方法〔1〕低值样本：将待测样本〔含被分析物〕用混合人血清〔含被分析物浓度水平较低〕或5%牛血清白蛋白生理盐水溶液进展稀释，产生接近于方法线性X围低限浓度水平的样本，一般为5个浓度水平，浓度水平间隔应小于线性X围低限的10%。

〔2〕高值样本：选取含被测物的高值样本，必要时可添加被分析物的纯品，并计算出理论值使用混合血清或5%牛血清白蛋白生理盐水溶液或测定方法要求的稀释液对高值待测样本进展稀释，使其接近于线性X围的上1/3区域内，并记录稀释倍数至少选用三个高浓度样本，稀释倍数应为方法性能标明的最大稀释倍数、并适当增加或减小稀释比例在一次运行中将低值样本重复测定10次，高值稀释样本重复测定3次3.数据处理3.1 数据记录：可根据附表进展数据记录3.2 数据统计：分别计算AVE()、SD、CV值对于可报告X围高限还应计算乘以稀释倍数后的复原浓度和相对偏差4.1 可报告X围低限：以方法性能标示的CV值为可承受界值，由数据中选取CV值等于或小于可承受界值的最低浓度水平做为可报告X围低限4.2 可报告X围高限：选取复原浓度与理论浓度的偏差〔%〕等于或小于方法标示CV值时的最大稀释倍数为方法推荐的最大稀释倍数，方法线性X围的上限与最大稀释倍数的乘积为该方法可报告X围的高限附表：可报告X围〔低限〕数据记录表浓度1浓度2浓度3浓度4浓度512345678910AVESDCV%可报告X围〔高限〕数据记录浓度1浓度2浓度3123AVE稀释倍数复原浓度理论浓度相对偏差〔%〕附件5体外诊断试剂分析性能评估指导原如此——准确度〔回收实验〕〔征求意见稿〕 一、概述准确度评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一。

定量检测方法的回收实验是评估准确度的方法之一，用于评估定量检测方法准确测定参加纯分析物的能力，结果用回收率表示本指南基于国家食品药品监视管理局《体外诊断试剂注册管理方法〔试行〕》的有关要求，参考CLSI有关标准，对采用回收实验进展准确度评估的实验方法和数据处理方法进展了原如此性要求其目的是为生产企业采用回收实验方法进展准确度评估并准备准确度评估资料提供原如此性指导，也为注册管理部门审核该局部分析性能评估资料提供技术参考同时，本指南亦可指导临床实验室采用回收实验方法对准确度进展评估由于体外诊断试剂产品开展速度快、专业跨度大，国家食品药品监视管理局将根据体外诊断试剂开展的需要，适时对本指南进展修订二、回收实验评估的根本原如此1.实验人员应熟悉测定方法与仪器操作2.采用适宜的校准品、质控品并保持仪器处于正常状态三、回收实验的评估与数据处理方法1.1 选择适宜浓度的常规检测样本，分为体积一样的3-4份1.2 在其中2-3份样本中参加不同量的待测物标准，制成2-3个不同参加浓度的回收样本，计算参加的待测物的浓度1.3 在另一份样本中参加同样量的无被测物的溶剂，制成根底样本用待评价方法对回收样本和根底样本进展测定，通常对样本进展2-3次重复分析，取其均值进展计算。

3.1 计算回收率：回收率1 = 3.2 计算平均回收率：平均回收率 =3.3 计算比例系统误差：比例系统误差 = 100% - 平均回收率3.4 可承受判断：比例系统误差不大于CLIA 88允许总误差的1/24． 须知事项：4.1 参加体积：参加的标准液体积一般在样本体积的10%以内；并且保证在加样过程中的取样准确度4.2 参加待测物的浓度：在保证总浓度在方法分析测量X围内，尽量使参加标准液后样本中的被测物浓度达到医学决定水平4.3 标准物浓度：因为标准物溶液参加体积不到10%，为保证得到不同浓度的回收样本，标准物的浓度应该足够高5．X例——某法测定血清葡萄糖回收率5.1 样本制备：〔1〕根底血清：血清1ml〔浓度5.5mmol/L〕+蒸馏水0.1ml;〔2〕 回收样本1：血清1ml+0.1ml葡萄糖水溶液〔浓度22mmol/L〕; 〔3〕 回收样本2：血清1ml+0.1ml葡萄糖水溶液〔浓度55mmol/L〕；5.2 采用待评价方法，按照从低到高的浓度顺序，每个样本测定3次，取平均值填入下表：测定浓度mmol/L参加浓度mmol/L回收浓度mmol/L回收率%根底样本分析样本1103分析样本2995.3 计算平均回收率：平均回收率 = = 101%。

5.4 计算比例系统误差：比例系统误差 = |100% - 101%| = 1%5.5 可承受判断： > 1%, 该方法的回收试验〔准确度〕试验可承受附件6：体外诊断试剂分析性能评估指导原如此——准确度〔方法学比对〕〔征求意见稿〕 一、概述很多临床实验室内部，通常会有两个以上的检测系统，多个检测系统之间应该定期进展比对对于开放检测系统，也应该对系统进展验证，其中最重要的一项便是准确度的评价，准确度评价可以通过方法学比对来实现，利用两种方法的比对对非配套系统的准确度进展评估是评估准确度的方法之一准确度评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一本指南基于国家食品药品监视管理局《体外诊断试剂注册管理方法〔试行〕》的有关要求，参考CLSI有关标准，对采用方法学比对进展准确度评估的实验方法和数据处理方法进展了原如此性要求其目的是为生产企业采用方法学比对进展准确度评估并准备准确度评估资料提供原如此性指导，也为注册管理部门审核该局部分析性能评估资料提供技术参考同时，本指南亦可指导临床实验室采用方法学比对进展准确度评估由于体外诊断试剂产品开展速度快、专业跨度大，国家食品药品监视管理局将根据体外诊断试剂开展的需要，适时对本指南进展修订。

二、方法学比对的根本原如此1.熟悉待评价系统2.编写仪器标准操作规程，其中包括校准程序和室内质控程序3.比对方法的选择：对于比拟、对方法，采用符合生产厂家要求的实验室现行方法，或采用公认的参考方法比对方法应具有以下条件：〔1〕具有比实验样品方法更好的精细度〔2〕没有的干扰物〔3〕同实验样品方法具有一样单位比拟方法应该选择正确性经过验证的方法，根据实际条件，选择的顺序如下：参考方法、原装系统、配套系统、经过验证的非配套系统4.待评价方法的处理：进展方法学比照实验前，应该对系统进展初步评价〔可参考NCCLS EP-10〕，并且对待评价方法进展精细度评价〔参考相关标准〕，只有在以上评价完成并且达到相关标准后，才可进展比照实验三、方法学比对的评估与数据处理方法1.1 按照实验对样品的要求收集处理病人样品，样本贮存时间与条件由被测组分的稳定性而定，尽可能防止使用贮存的样品1.2 样品应来自于许多病人，并且此病人的疾病对于被测组成的影响应该是知道的，不要使用含有干扰此方法的组分或条件(如溶血)样品1.3 在具有临床意义X围内即医学决定水平X围内，评价实验样品方法，通常根本从低于参考X围的低限到高于参考X围的高限。

分析浓度尽可能在报告的浓度X围内均匀分布商品质控物或者校准物可能存在基质效应，应防止使用2.1 每天选择8个临床病人样本，按1到8的顺序编号用两种方法同时进展实验，按照1，2，3，4，5，6，7，8，8，7，6，5，4，3，2，1的样本顺序进展测定2.2 以上实验至少重复5天，即至少分析40个不同的临床病人样本每天实验必须进展校准和室内质控只有在室内质控合格的情况下，当天的实验室数据才有效3.1 记录测定结果〔Xii和Yjj〕3.2 计算每个样本测定的均值〔和〕，样本重复测定间差值的绝对值〔DXi 和DYi〕与两种方法测定结果间的差值〔-〕3.3 以对作散点图3.4 以〔-〕对做偏倚图3.5 以〔Yjj-Xij〕对做偏倚图3.7 检查批内离群点：计算样本重复测定间差值〔DXi 和DYi〕的平均数，实验结果差值超出平均数4倍时，如此判断为离群点3.8 检查批间离群点：计算两种方法测定结果间均值差值(-)的平均数，超出该平均数4倍时，如此判断该样本为离群点3.9 相关系数计算：利用所有样本双份测定值进展相关系数计算，如果≥0.975(或2≥0.95)，如此认为XX围适合，数据满足要求X的误差可以由数据X围给以适当补偿，并且简单的线性回归可以用来评价斜率和截距。

如果r2<0.95，那么必须通过分析另外一些样品以扩大数据X围，然后再检查全部数据系列如果没有超出X围，采用分步偏差程序代替线性回归，评价平均偏差3.10回归计算：利所有样本双份测定的有效数据，计算两个方法间的线性回归方程：Y=a+bX.3.11 偏差估计：在医学决定水平，利用回归方程计算预期偏差,预期偏差Bx=a+(b-1)X,相对偏差=Bx/X3.12 根据相关规定，判定预期偏差、相对偏差是否在规定X围内附件7：体外诊断试剂分析性能评估指导原如此——精细度〔征求意见稿〕 一、概述精细度是衡量体外诊断试剂批内和批间变异的重要指标，通常包括批内和批间不精细度精细度评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一本指南基于国家食品药品监视管理局《体外诊断试剂注册管理方法〔试行〕》〔以下简称《方法》〕的有关要求，参考CLSI有关标准，对定量检测方法中精细度的评估和数据处理方法进展了要求其目的是为生产企业进展定量检测方法中精细度的评估提供原如此性指导，也为注册管理部门审核该局部分析性能评估资料提供技术参考同时，本指南亦可指导临床实验室进展定量检测方法的精细度评估。

由于体外诊断试剂产品开展速度快、专业跨度大，国家食品药品监视管理局将根据体外诊断试剂开展的需要，适时对本指南进展修订二、定义是众多种类精细度中最根本的一个，它是在严格的相似条件下，所得到的最优的精细度指在同一实验室，由同一〔组〕操作员在同一仪器上，使用同一方法和同种、同一批号试剂，在一段时间内(一般为一个月或20个工作日)对同一测试样品〔常用质控品〕测量结果的精细度三、精细度评估的根本原如此1.操作者必须熟悉方法和/或仪器工作原理，了解并掌握仪器的操作步骤和各项须知事项，能在评估阶段维持仪器的可靠和稳定2.用于评估试验的样品一般常采用临床实验室收集的稳定和冷冻贮存的血清(浆)库；当实验室收集的样品不稳定或不易得到时，也可考虑使用稳定的、以蛋白质为基质的商品物质，如校准品或质控品3.评估精细度时，应至少评估二个浓度水平样本的精细度当二个浓度的精细度有显著差异时，建议增加为三个浓度所选样本浓度应在测量X围内有医学意义，即至少有一个浓度在医学决定水平(medical decision levels)左右不要为了得到较小的精细度，都选用较高值的样品，甚至超出测量X围也不应选用靠近最低检出限的样品，此时所得的精细度往往偏大。

相当多的检验项目低值常无实际临床意义，但有少数检验项目，其低值也有临床价值，此时就需要评估有判断价值的低值精细度，适用时，可进展功能灵敏度的评估如没有医学决定水平，可在参考区间上限左右选一个浓度此外，再根据检验项目的性质在线性区间内选择另一个值如与厂商或文献报导的精细度进展比拟，所选浓度应与被比拟精细度的浓度相接近否如此，有可能得出不恰当的结论四、精细度评估的方法和数据处理1.1 试剂和校准品：应使用同一种类、同一批号的试剂和校准物,如可能,只进展一次校准使用不同批号试剂和屡次校准都会增加检验结果的变异程度1.2 评估方法：在以上条件满足的情况下，在一批内对样本进展重复测定，至少进展20次重复测定1.3 质量控制：检验时应同时至少测一个质控品当质控品结果超出规定的失控限，不论实验结果是否满意都应弃去不用，重新进展试验以取得20个实验数据要保存所有的质控数据和失控处理记录 1.4 数据收集：在进展数据分析前，检查数据中有无由于偶然过失引起的离群值(outliers)，可用下述离群值的标准；从已收集的20数据计算出总均值和标准差，任何结果和总均值的差值超过4个标准差时，可认为是离群值为了能收集到至少20个有效数据。

除补充由于质控失控而增加的测试外，还应再增加由于离群值不用于精细度的计算所需增加的检验次数在进展这种批内精细度评估实验时，一次只能有一个离群值，当离群值超过1个时，应怀疑是否为方法不稳定或操作者不熟悉所致此时，应不用此次试验数据检查问题和解决问题后重新开始新的评估实验1.5数据的记录：将所收集到的数据记录在表1：表1 批内精细度实验原始数据记录序号测量值〔均值-测量值〕212......1920均值1.6 批内精细度估计值的计算求出均值：=∑Xi/n使用如下公式计算出批内标准差估计值的标准差1.7 批内精细度估计值的95%可信限查统计表得出自由度20的上限公差因数为1.25，相应下限公差因数为0.75，得出批内精细度的95%可信区间为：〔批内精细度×0.75〕-〔批内精细度×1.25〕2.1 评估方法：每天做2个批次的测试，每批测试时，对同一样品作双份测量，共做20天评估完毕时共有40对，即80个测试结果从40批次测量中双份结果的差值求出批内精细度从所有80个数据计算出批间精细度在实施此项评估工作时，必须由同一个或一组操作者在同一台仪器上进展，应该使用一样的校准品、一样种类和批号的试剂。

所用时间不得少于20个工作日，这样所测到的精细度能更好地反映出该临床实验室定量测量方法在一段时间内的理想或最适的稳定性 在每一批次测量中，必须同时测量质控品，以保证结果是可靠的，数据能够采用注：①也可以一日进展一个批次测量，一个批次中对同一样品重复测量4次，共测20个工作日，由80个数据求出批内和批间精细度；②如果取得稳定样品有困难，也可改为测5日，每日2个批次，每个批次测一个样本8次仍有80个数据从10个批次中每一样品8次差异算出批内精细度从所有80个结果计算出批间精细度要收集到足够有效数据(至少为80个数据)除补充由于质控失控而增加的测试外，应在进展数据分析前，检查数据中有无由于偶然过失引起的离群值(outlier)，可用下述剔除值的标准；从实施段已收集的40对均值的数据计算出总均值和标准差，出现如下任何一种情况都可认为是离群值：〔1〕任何一对均值和总均值的差超过4倍标准差〔2〕任何一对中二个结果的绝对差值超过4倍标准差离群值不用于精细度的计算在剔除后应再增加检验次数，以保证至少有40批次，80个数据进展计算注：任何一次实验的剔除值不能超过总测量数的2.5%当超过时，应怀疑是否为方法不稳定或操作者不熟悉所致。

此时应不用此次试验数据，重新开始新的试验将所收集到的数据记录在表2表2 精细度实验原始数据记录序号日期批次1批次2结果1结果2均值结果1结果2均值12…………1920按表3要求对数据进展进一步计算，将结果填入表3表3 精细度实验原始数据计算日批次1批次2〔结果1-结果2〕2〔结果1-结果2〕212…………1920利用表4中的结果(3)、(4)可计算出批内精细度Sr： ，其中I=检验日数2.5 批间精细度估计值的计算将上述实验结果记录在表4中表4：批间精细度实验原始数据记录序号日期第一批第二批结果1〔均值-结果1〕2结果2〔均值-结果2〕2结果1〔均值-结果1〕2结果2〔均值-结果2〕212……1920合计(1)(5)(2)(6)〔3〕〔7〕〔4〕〔8〕求出均值，公式为：从上表得出：求出批间精细度，公式为：从上表得出式中n=检验总数2.6 批间精细度估计值的置信区间由于检验次数不可能无限增加，当按规定方案，屡次重复测量，就是在很好控制条件下，也很难得到一样的值，换言之，通过这样实验的数值只是精细度的估计值，围绕“真值〞而变动变动的X围大小和检验次数密切相关人们往往在给出精细度值外，还给出其95%的置信区间。

置信区间与所测次数相关，次数愈多，可信限愈小可以查出与检次数相关自由度的0.95因数，乘以标准差值就可得出95%可信限的上、下值实际工作中，可查出95%可信限的上值的公差因数〔tolerance factor〕，由此计算出95%可信限实验室在报告精细度同时，可给出95%置信区间临床实验室在测定方法的精细度后，应评价得到的精细度是否满意，最简单方法就是与生产企业〔文献〕所提供的精细度进展比拟，判断是否存在差异如果临床实验室所测的精细度小于生产企业〔文献〕的精细度，说明临床实验室所得到的精细度是适宜的如果临床实验室测得的精细度大于生产企业〔文献〕的值，可利用F-检验法〔F-test〕，即方差比值检验〔variance ratio test〕对实验室测得的结果和生产企业提供的结果进展比拟计算表5是为此工作设计的数据记录和计算表格：表5 与生产企业〔文献〕声明批间标准差的比拟表实验浓度=声明浓度=实验标准差=sr或srr声明标准差=σr或σrr方差=sr2或srr2方差=σr2或σrr2测量次数自由度=n-1声明测量次数自由度=n-1注：标准差大小常与浓度有关，比拟时，必须检查二者浓度是否接近一致，如差异较大不应进展比拟。

如接近一致，按如下公式计算出F值，以批间精细度为例： F=Srr2/σrr2将计算出的F值和根据二组自由度从表6中查到的F值(p=0.05)进展比拟，如计算F值小于查表得出F值，虽然实验室得到的标准差大于声称值，但在统计学上无差异反之，说明实验室得到的标准差没有达到方法应达到的水平此时，实验室应该进一步改善条件，例如培训操作人员，修改操作程序或者维修仪器等再次进展测定仍然达不到时，应与生产企业讨论和取得协助表6 F分布临界值表(p=0.05)分母自由度分子自由度5 10 14 20 40 50 100 200 ∞05101520304060100120∞五、精细度的报告形式精细度的结果受众多因素影响，在报告测量精细度时，应同时说明如下各点：l 批内标准差与其95%置信区间；l 批内变异系数;l 批间标准差与其95%置信区间;l 批间变异系数;l 实验进展的工作日数;l 检验批次数;l 每个批次重复检验数和总检验数;l 试剂的种类和批号;l 校准品种类、批号和校准次数;l 如适用，使用仪器的种类和型号附件8：体外诊断试剂分析性能评估指导原如此——干扰实验〔征求意见稿〕 一、概述干扰物质是体外诊断试剂使用过程中造成测量误差的一个主要原因，针对体外诊断试剂进展的干扰实验是指通过实验查找出对体外诊断试剂测量结果产生影响的物质的过程。

干扰实验评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一本指南基于国家食品药品监视管理局《体外诊断试剂注册管理方法〔试行〕》〔以下简称《方法》〕的有关要求，参考CLSI有关标准，对干扰实验的评价方法、实验所需材料、实验过程与实验结果处理进展了原如此性要求其目的是为生产企业进展干扰实验评估与准备干扰实验评估资料提供原如此性指导，也为注册管理部门审核该局部分析性能评估资料提供技术参考由于体外诊断试剂产品开展速度快、专业跨度大，国家食品药品监视管理局将根据体外诊断试剂开展的需要，适时对本指南进展修订二、干扰实验评估的根本原如此〔一〕干扰物质来源：干扰物质可能来自内源或外源物质可疑干扰物质的来源通常有：1.常见的异常标本，例如溶血、黄疸与脂血；2.普通的处方药与非处方药；3.患者群体中异常的生化代谢物；4.患者群体中常见的治疗药物；5.干扰测量程序的药物〔包括代谢物〕；6.已报道干扰相似测量程序的物质；7.标本处理过程中的添加物，例如抗凝剂、防腐剂；8.采集与处理过程中接触标本的物质，例如血清别离设备、导管、标本收集容器与塞子；9.影响某些实验的膳食物质，例如咖啡因，β- 胡萝卜素，罂粟籽。

〔二〕在实施评价实验前，必须决定临床可承受的标准〔三〕在实施评价实验前，操作者必须熟悉仪器设备与测量程序并对精细度与准确度进展评价，在进展实验设计时要防止遗留效应影响分析结果，确保分析系统保持稳定三、干扰实验的评估与数据处理方法干扰物质对实验结果的影响，一般是通过测定对照或根底样本池中待测物的浓度计算得出的在某些情况下，对照样本池中可能含有一定量的内源性干扰物质，如胆红素、血红蛋白、蛋白质和脂类在一些测量程序中，采用标本前处理、样本空白、血清基质校正物和因子校正等手段以减少这些干扰物质在平均浓度下的影响，只有当患者样本中干扰物质浓度高于或低于平均水平时，由于干扰物质引起的误差才会显现出来基于此，有两种评估干扰物质的根本方法，每一种方法都有它的优点与内在局限性，当两种方法同时使用时，可提供相互补充的信息一种方法是将可疑干扰物质参加样本以评价干扰效果，另一种方法是测量个别有代表性病人标本，相对于高特异性可比拟的测量程序评价被分析测量程序产生的偏倚〔一〕干扰筛查评价很多可疑干扰物质在相对较高浓度下所产生的干扰，称此为“干扰筛查〞将可疑干扰物质参加根底样本池，计算实验样本相对于对照样本测量结果所产生偏倚，称此为“配对差检验〞。

如果可以观察到临床显著性影响，可以认为此种物质为干扰物质，需要进一步评估干扰物质浓度与干扰程度的关系〔1〕根底样本池：从一些未服用药物的健康个体获得新鲜标本，以此反响标本基质假如不能获得新鲜标本，可使用冷冻或冻干的标本代替，但应保证实验材料充分接近新鲜临床标本使用适当纯度的分析物将样本池中分析物的浓度调整到医学决定水平，但要防止引入其它的干扰物质〔2〕储存溶液：准备一种适当纯度或者最接近循环形式的可疑干扰物质选择一种实验物质能充分被溶解的溶剂，例如试剂纯水、稀释的HCl或NaOH、甲醇或乙醇、丙酮、二甲亚砜〔DMSO〕与其他有机溶剂制备至少20倍干扰物实验浓度的储存溶液〔3〕每个标本所需要的重复测量次数：双侧检验的实验重复次数为：，单侧检验用Z1-α代替Z1-α/2其中，Z1-α/2是双侧检验的可信度为100(1-α)% 时标准正态分布相对应的百分位数；Z1-α是单侧检验的可信度为100(1-α)% 时标准正态分布相对应的百分位数；Z1-β是把握度为100(1-β)%时标准正态分布相对应的的百分位数；dmax是检测分析物浓度时最大允许的干扰〔interference〕；s是测量程序的重复性标准差。

由于实验次数必须为整数，所以将计算结果四舍五入为整数〔4〕干扰物实验浓度：干扰物质浓度应达到病理标本的最高浓度值〔5〕分析物实验浓度：分析物实验浓度应选择两个浓度水平在大多数情况下，可选择医学决定水平、参考X围的上、下限或病理浓度〔1〕选择适当的分析物浓度；〔2〕建立一个临床上显著性差异〔dmax〕的标准；〔3〕决定每个样本的重复次数；〔4〕制备一个根底样本池；〔5〕制备一个储存溶液；〔6〕制备实验样本，将储存溶液加至容量瓶体积的1/20，再用根底样本加至刻度，混匀；〔7〕制备对照样本，将溶剂加至另一容量瓶体积的1/20，再用根底样本加至刻度，混匀；〔8〕在同一批测定中，交替分析实验〔T〕与对照样品〔C〕，例如C1T1C2T2C3T3....Tn；〔9〕记录分析结果计算dobs、dc与95%可信区间是实验、对照样本分析物平均值的差值，公式为，在双侧检验中，，在单侧检验用Z1-α代替Z1-α/2；95%可信区间的计算公式为：，n为每份标本重复测量数，dnull经常取值为0 当dobs小于或等于dc时，不拒绝无效假设，认为检测物质不是干扰物质；当dobs大于dc时，拒绝无效假设，承受备择假设，认为检测物质是干扰物质。

当95%可信区间的下限小于或等于dmax，认为检测物质不是干扰物质；当95%可信区间的下限大于dmax，可认为检测物质是干扰物质〔二〕干扰效果评价如果在一个或多个分析物质浓度发现干扰，进展剂量反响实验以确定干扰物质浓度与干扰程度的关系〔1〕根底样本池；〔2〕储存溶液；〔3〕高值样本池：根底样本池稀释储存溶液以达到所需浓度；〔4〕低值样本池：准备一个干扰物质浓度接近临床标本平均浓度的样本池〔1〕决定可疑干扰物质的最高和最低浓度；〔2〕建立一个临床上显著性差异的标准；〔3〕决定每个浓度水平的重复次数〔一般为3次〕；〔4〕制备高、低值样本池；〔5〕制备一个中值样本池，将等量的高值与低值样本参加一个适当的容量瓶中，混合均匀；。