用异硫氰酸苯酯

苯乙内酰硫a®（PTH）用异硫氰酸苯酯（PITC）与待分析多肽的N-端氨基在碱性条件下反应,生成苯氨基硫代 甲酰胺（PTC）的衍生物，然后用酸处理，关环，肽链N-端被选择性地切断，得到N-端 氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物接着用有机溶剂将该衍生物萃取出来，酸作用下， 该衍生物不稳定，会继续反应，形成一个稳定的苯基乙内酰硫脲（PTH）衍生物余下 肽链中的酰胺键不受影响通过用HPLC或电泳法分析生成的苯乙内酰硫脲（PTH-氨基 酸），可以鉴定出是哪一个氨基酸每反应一次，结果是得到一个去掉N-端氨基酸残基 的多肽，剩下的肽链可以进入下一个循环，继续发生降解以上方法已经可以自动化［2月根据此原理设计出的自动分析仪进行分析时，能够可靠 地测定肽链的 30个左右氨基酸残基序列，最多可以分析50-60个氨基酸残基在最好 的条件下，每形成一次PTH-氨基酸，效率可保持在99%以上而且此法用量少，一般只 用10-100皮摩尔的多肽即可测定氨基酸序列对于肽链较长的多肽，可以先将肽链切 断成多个小肽，对这些小肽进行氨基酸分析，然后将这些信息拼接起来，得到起始肽链 中的氨基酸序列由于Edman降解是以化学试剂对N-端氨基的修饰为基础的，因此当N-端被其他化学基 团所封闭时，就需要先去除这些基团，然后才能进行测序。

此外，蛋白质中含有半胱氨 酸残基时，有时两个半胱氨酸残基会发生二硫键交联这种情况下，需要先用过酸将二 硫键氧化为-SO3H，然后才能用Edman降解测定序列Phenyl isothiocyanateH 0CH3o-LabelingReleaseHPTH-alanine餐白破一瑕给构的测定（Edman法）H2N—Gly—Asp—Phe Arg Gly—CPeptide shortened 0by one residue。