铁皮石斛论文

大理学院2014届生物技术专业本科学生毕业论文铁皮石斛组培幼苗几种生长因素的研究Study of Some Factors on the Growth of Tissue Culture Seedlings of Dendrobium Candidum学 院 专 业生物技术 姓 名 年级学号 指导教师 职 称讲师 起止日期 制表日期：2014年5月5日一、 中文题目、摘要、关键词 1二、 英文题目、摘要、关键词 .2三、 前言 3四、 正文 .41、 材料 .42、 实验方法 .43、 测定指标 44、 实验结果 .55、 讨论与分析 .86、 结论 .9五、 参考文献. …… ..10六、 总结与体会 ……..-..12七、 谢辞 13铁皮石斛组培幼苗几种生长因素的研究方瑞花（大理学院农学与生物科学学院2014届生物技术班，云南大理671003） 指导教师：施继惠讲师摘要：以铁皮石斛组培幼苗为材料，探究不同浓度的香蕉和土豆添加物及其不同 浓度的（土豆、香蕉）混合添加物，不同基础培养基（MS和1/2MS），3种不同 碳源对组培幼苗壮苗、生根的影响。

结果表明：（1）添加物，20%香蕉＞15%香蕉、 土豆混合物＞20%土豆；（2）1/2MS比MS培养基更适合组培幼苗的生长；（3）相同 浓度条件下不同碳源效果为：白砂糖〉蔗糖〉葡萄糖因此，铁皮石斛幼苗最佳的 壮苗培养基为：1 / 2MS+白砂糖20g/L+活性炭2g/L +20%香蕉+9g/L琼脂， PH5.8-6.0关键词：铁皮石斛幼苗；添加物；碳源Study of Some Factors on the Growth of Tissue Culture Seedlings of Dendrobium CandidumFang Rui hua（Department of Agriculture and Biology , Dali University ,Yunnan, Dali 671003, China） Instructor： Shi Ji hui[Abstract]: In this article we study the effect of banana、potato and the mixture on cultivating strong seedlings and rooting of Dendrobiurn candidum. The effects of some factors by different medium and carbon source on the growth of tissue culture seedlings. The results showed:（1）The effect with additive on cultivating strong seedlings and rooting of the concentration was 20% banana > 15% mixture with banana and potato >20% potato. （2） The medium of 1/2MS was the most suitable than the medium of MS on cultivating strong seedlings and rooting. （3）The order of Influence with strong seedlings and rooting when the same concentration of carbon source was :white granulated sugar> cane sugar > glucose. The results showed : The most suitable medium for seedlings growth and rooting was 1/2MS+ white granulated sugar 20 g/L+ activated carbon 2g/L+ banana 200g/L+9g/L agar , pH5.8-6.0Key words: Dendrobium candidum ； additive ； carbon source前言铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall, ex Lindl )属兰科石斛属多年生附 生草本别名铁皮兰，因其茎节处呈黑褐色，又名黑节草⑴。

在我国主要分布于广 西、云南、贵州等地，生长在海拔达1600m左右的山坡半阴湿的岩石上⑵铁皮 石斛是2005年版《中国药典》收录的3种石斛原植物之一，是石斛药材中最珍贵 品种，具有滋阴清热、益胃生津、止咳润肺的功效⑶近年来研究表明铁皮石斛 中含有丰富的多糖类成分，这种多糖成分具有增强人体免疫力、防癌抗癌、恢复 嗓音等功效，是极其珍贵的中药材⑷由于近年来过度采挖、原始森林生态环境破坏等原因，使得野生铁皮石解资 源面临枯竭，供应紧张；加上铁皮石解繁殖系数低，远不能满足生产上的需要⑸ 为保护这一珍贵中药品种，许多学者对铁皮石解种子和茎尖培养技术进行了研 究，但在试管苗阶段增值系数低、试管苗茎细小、细弱，移栽成活率不高，影响 了铁皮石解试管苗快繁和大规模的工厂生产［6-8］本实验在前人研究的基础上，以铁皮石解组培幼苗为材料，系统地研究2种 添加物及其混合添加物、2种培养基、3种碳源对试管苗壮苗、生根的影响，以提 高铁皮石斛在组织培养中的增殖率和生根率，为工厂化育苗提供技术支撑⑼1. 材料由学院组培室提供的，无菌、生长良好，株高0.5~1.0cm,具有1-2片真叶的 无根铁皮石斛组培幼苗，用于幼苗壮苗和诱导生根等生长因素的研究。

2. 试验方法2.1添加物的筛选设9个处理，即以香蕉、土豆及其混合物各15%、20%、25%为添加物，添加至 相同激素配比的1/2MS （蔗糖5%+活性炭2g/L培养基，琼脂9g/L，pH5.8-6.0） 以不加添加物（K1）的处理为空白对照，每个处理5瓶，每瓶接种10颗组培幼苗， 3个月后统计结果2.2 MS和1/2MS培养基的筛选设6个处理，即以香蕉、土豆各20%为添加物，分别添加至相同激素配比的 MS和1/2MS培养基（蔗糖5%+活性炭2g/L培养基，琼脂9g/L，pH5.8-6.0） 以不添加任何添加物的MS和1/2MS培养基为空白对照，每个处理5瓶，每瓶接 种10颗组培幼苗，3个月后统计结果2.3不同碳源的筛选设3个处理，即以浓度均为20g/L的蔗糖、白砂糖、葡萄糖为碳源，添加至相 同激素配比的1/2MS+活性炭2g/L培养基，琼脂9g/L，pH5.8-6.0每种接种5瓶， 每瓶接种10颗组培幼苗，3个月后统计结果3. 测定指标及方法3.1苗数取出全部5瓶材料，用镊子将幼苗全部取出，放置培养皿中待用数出肉眼 可见的幼苗数，记录数据，统计各参数的总和如表13.2株高取出全部5瓶材料，用镊子将幼苗全部取出，放置培养皿中待用。

测量50 株石斛苗的株高［1］，记录数据，即50个材料/组，计算各参数平均值如表1 3.3根数及根长取出全部5瓶材料，用镊子将幼苗全部取出，即50个材料/组，放置培养皿 中待用数出肉眼可见的根数，并用尺子测量其根长［10］记录数据，计算各参数 平均值如表14. 实验结果4.1不同添加物对幼苗的影响表1添加物对幼苗的影响编号添加物及浓度株高/cm根长/cm平均根数数/条叶宽/cm总苗数/颗生长状况X2香蕉15%1.801.754.390.35105均匀整齐，健壮X3香蕉20%3.561.876.710.45179均匀整齐，根粗壮X4香蕉25%1.641.505.010.30160均匀整齐，健壮T2土豆 15%1.701.433.550.30133不整齐，弱T3土豆 20%3.111.724.210.40149均匀整齐，弱T4土豆 25%1.601.063.480.40105不整齐，弱H2混合物15%3.432.515.790.45160均匀整齐，根粗壮H3混合物20%1.941.695.270.40137均匀整齐，健壮H4混合物25%1.101.424.600.35105均匀整齐，健壮注：混合物为香蕉和土豆的各半均匀混合添加物。

株高”的测量标准足从植株基部至新叶 叶鞘环痕处叶宽”的测量标准是选择各株中最宽新叶测量其值，最长叶通常即为最宽叶根数”的测量标准是植物中所有根总数［1］ “根长”测量标准是植株所有根的平均长度图1 20%香蕉（左）15%混合物（中）20%土豆（右）由表1和图1知，从株高、苗数、根数、根长、叶宽等指标综合来看，在添加 的12个处理中：（1）以添加20%香蕉效果最好，其根长达1.87cm，株高3.56cm， 根诱导率［12达到6.71，总苗数179颗，幼苗增殖效果也最好，可能是由于根的分 化形成，加快了植株营养的吸收，促进了茎叶的生长，达到了壮苗生根的目的（2） 其次是15% （香蕉、土豆）混合添加物效果较好，根长2.51cm，株高3.43cm，平 均根数5.79，总苗数160条（3）最后是20%土豆的生长效果，根长1.72cm，株高 3.11cm平均根数4.22，总苗数149条综上所述：添加物，20%香蕉＞15% （香蕉+土豆）＞20%土豆，表现在根粗壮， 均匀整齐，叶色浓绿这表明，香蕉有利于诱导铁皮石斛生根并且在一定程度上 起到壮苗作用，而且香蕉、土豆混合添加物效果均比土豆添加物更好4.2 MS和1/2MS培养基对幼苗影响表2 MS和1/2MS培养基对幼苗的影响编号添加物及浓度培养基株高/cm根长/cm平均根数总苗数/颗生长状况X3香蕉20%1/2MS3.561.876.71179均匀整齐，根粗壮X3-1香蕉20%MS2.361.413.90110均匀整齐，根细T3土豆 20%1/2MS3.111.724.21159均匀整齐，根细T3-1土豆 20%MS2.101.212.5897不整齐，弱K1-1/2MS1.540.862.50104均匀整齐，根细K2-MS1.330.592.0084不整齐，弱图 2 MS+20%香蕉（X3-1）； MS+20%土豆（T3-1）；图3 1/2MS培养基(K1)； MS培养基(K2)由表2可知:K1>K2,即幼苗在1/2MS培养基上，普遍长势均匀，株高1.5-2.5cm, 根长0.86-1.87cm,平均根数2.50-6.71条；在MS培养基上，幼苗生长一般不整齐， 苗弱，株高 1.3-2.3cm，根长0.59-1.41cm,平均根数2.00-3.90cm。

由图1与图2相比较：长势、株高、整齐度上均为:X3>X3-1； T3>T3-1；即加 添加物的1/2MS培养基均比加添加物的MS培养基长势更好由图2与图3比较：X3-1、T3-1均比K1、K2长势更好，可知加了添加物的培养 基比不加添加物的植株长势更好由图3可直观看出，K1在长势，株高、整齐度均比K2更好因此，无论是否添加附加物，1/2MS培养基都比MS培养基更适合铁皮石斛组 培试管苗阶段幼苗的生长4.3不同碳源对幼苗影响表3不同碳源对幼苗影响编号碳源培养基株高/cm根长/cm平均根数数/条总苗数/颗生长状况X蔗糖1/2MS3.420.822.3288均匀整齐，根细Y白砂糖1/2MS3.751.103.17106均匀整齐，根细M葡萄糖1/2MS3.250.681.9680均匀整齐，根细碳源为铁皮石斛幼苗的生长提供必需的能量，不同的碳源对铁皮石斛幼苗的 生长有不同的影响由表3可知，3种碳源的幼苗的长势均为根细，可能与碳源的添加浓度、激素配比等有关，本实验不做探究本实验由表3可知：3种碳源幼苗苗高，2.75cm>2.42cm>2.34cm；根长， 1.10cm>0.82cm>0.68cm；平均根数，3.17cm>2.32cm>1.96cm；总苗数，106>88>80。

因此从幼苗株高、根长、平均根数、总苗数等指标上看均为：白砂糖蔗糖〉葡萄 糖，白砂糖为碳源的培养基更适合铁皮石斛幼苗生长需要5. 分析与讨论5.1添加物香蕉和土豆都属于天然添加物，它们的某些成分在培养基中一定程度上充当 了缓冲剂，能够调节培养基的pH值，对植物的生长起到促进或抑制的作用蒋林 和李小军等研究认为附加物中含有各种天然营养成分及各种植物生长调节物质， 对于石解试管苗的生根壮苗较为有利［12-13］，本实验结果也证实了这一点该研究结果表明：香蕉、土豆提取物及其混合物对铁皮石斛茎叶分化苗均有 促根效果香蕉泥对幼苗的壮苗与生根的促进作用明显优于土豆，这与蒋波发现 香蕉提取物对铁皮石斛的生根壮苗的效果明显优于其它的附加物［14］，结果相似实验以20%香蕉的促进作用最突出，其次是15%香蕉、土豆的混合添加物较好， 最后是20% 土豆的壮苗效果良好这与李国树［15］以100g/L的香蕉提取物诱导根效 果最佳不同，可能是研究培养基的激素、碳源等营养成分的浓度存在差异，导致 实验结果不同5.2培养基在组织培养中，不同类型培养基所含的化学成分及其浓度各异，不同植物及 植物的不同生长阶段对营养成分的需求亦不相同，因此筛选合适类型的培养基是 组织培养的首要任务。

该实验发现铁皮石斛幼苗在1/2MS培养基中生长较好，与 MS培养基更适合铁皮石斛组培幼苗的生长这与吴辉等［16］研究得到1/ 2MS培养基 适合金钗石斛试管苗生根的结果相似但谢寅峰等［17］研究得到MS基本培养基添加 20%香蕉泥时霍山石斛生根效果最好石斛品种不同，所需营养成分的浓度存在 差异，这可能是导致试验结果不同的原因5.3碳源培养基中的碳源是影响幼苗生长的关键因素，合适的碳源能使植株健壮，生 长速度加快该研究结果表明:相同浓度、相同条件下的几种不同碳源植株生长 效果为，白砂糖〉蔗糖〉葡萄糖因此以白砂糖为碳源的培养基更适合铁皮石斛幼 苗的生长需要这可能是白砂糖主要成分为蔗糖被细胞分解后形成葡萄糖和果糖, 可比单纯添加葡萄糖提供更均衡的碳源，因而有利于幼苗的生长与魏梅娟等[18] 得到50g/L葡萄糖更有利于铁皮石斛壮苗生长结果不同，可能是研究实验所采用 的添加物、激素配比浓度不同导致的差异6, 结论在铁皮石斛试管苗的培养过程中，影响其生长的因素很多该实验在其他条 件相同的情况下，通过对天然添加物、培养基种类、碳源为探究单一因素变化对 石斛试管苗生长的影响实验结果表明：（1）1/2MS培养基并且在其他条件不变 的情况下，以20%香蕉为添加物，对幼苗的壮苗与生根的促进作用最好，其次是 15% （土豆、香蕉）混合添加物，最后是20%土豆添加物°（2）1/2MS比MS培养基 更适合组培幼苗的生长（3）相同浓度的蔗糖、葡萄糖、白砂糖相比较白砂糖效 果最好。

因此，铁皮石斛幼苗最佳的壮苗培养基为：1/2MS+ 白砂糖 20g/L+活性炭 2g/L +20%香蕉+9g / L 琼脂，pH5.8-6.0参考文献[1] 叶秀妹，刘炜婳，赖钟雄.铁皮石斛组织培养研究进展[J].亚热带农业研究， 2012,8(1):57-61.[2] 王丽萍，梁淑云.铁皮石斛原球茎诱导与增殖研究[J].中国农学通报2010,26(01):265-268.[3] 莫昭展，贝学军,韦江萍，等.不同培养条件对铁皮石斛原球茎增殖的影响[J].安徽农业科学,2007,35(22):6835-6836.[4] 杨虹，王顺春，王峥涛，等.铁皮石斛多糖的研究[J].中国药学杂 志，2004,39(4):254.[5] 陈瑞蕊，林先贵,施亚琴，等.药用石料及其组培技术研究概要[J].江苏农业科学,2002,(5):65-66.[6] 张明，夏鸿西，张玉进，等.石料组织培养研究进展[J].中国中药杂 志，2000,25(6):323-326.[7] 唐桂香，黄福灯，周伟军，等.铁皮石解的种胚萌发及其离体繁殖研究[J].中国中药杂志,2005,30(20):1583-1586.[8] 朱艳，秦民坚.铁皮石解茎段诱导丛生芽的研究[J].中国野生植物资 源，2003,22(2):56-57.[9] 周俊辉，钟雪锋,蔡丁稳，等.铁皮石解的组织培养与快速繁殖研究[J].仲恺农业技术学院学报,2005,18(1):23-26.[10] 苏江,岑忠用，晰朝，等,2种不同附加物对铁皮石斛增殖和生长的影响研[J].河池学院学报,2012,32(5):9-12.[11] 陈继敏，蓝伟泉，陈旭敏，等.不同添加物对石斛兰牡苗生根的影响[J].北方 园艺,2009(3):78-81.[12] 李小军，刘石泉,潘维陵，等.香蕉提取物对霍山石料试管苗壮苗的影响[J].江苏大学学报：自然科学版,2004,25(6):469-472.[13] 蒋林，卓宇，莫昭展，等.流苏石斛丛生芽增殖和生根的研究[J].时珍国医国 药，2012,23(9):2310-2312.[14] 蒋波,杨存亮，黄捷，等.铁皮石解原球茎生长分化及生根壮苗研究[J].玉林 师范学院学报：自然科学版,2005,26(3):66-69.[15] 李国树，徐成东，尚正丽，等.五种果蔬提取物对铁皮石斛茎叶分化苗促根效 果的影响[J].北方园艺,2013(06):161-163.[16] 吴辉,赵俊,宋锡全，等.四种不同培养壤对诱导金钗石斛幼苗生根的影响[J]. 贵州科学,2007,25(2):65-66.[17] 谢寅峰，徐丽，王莹，等.霍山石斛组培丛生芽诱导增殖及生根技术[J].林业 科技开发,2007,21(6):72-74.[18] 魏梅娟，李雪，叶清梅，等.铁皮石斛组培苗生长的影响因素研究[J].北方园 艺，2011(02):146-148.总结与体会四个多月的毕业论文终于结束了，我的大学生活也将随之结束。

在这短短的 四个多月里，我付出了许多，也收获了许多，回想起来还真有不少的体会首先要感谢我的指导老师施继惠老师，她在整个实验操作和论文的完成及答 辩中给了我极大的帮助和支持刚拿到题目时，我对课题充满了新鲜感，在导师 的指导下我查阅了大量关于课题的文献，使我对课题的研究内容和国内外的研究 进展有了更多的了解，也使我对自己的课题产生了浓厚的兴趣在整理论文阶段， 施老师不辞辛苦的反复为我修改论文，并为我的答辩提出了许多建设性的意见毕业论文是对我大学四年所学基础知识的专业知识的一次全面检验，通过撰 写论文和毕业答辩，我觉得对自己的语言组织能力，表达能力，沟通交际能力， 运用所学知识的能力，分析问题并解决问题的能力都有所提高，也使我变的更加 自信、成熟总之，在整个实验操作和论文完成的过程中，我体会到的是实验的艰辛和收 获的充实，感受到的是一种坚持不懈、契而不舍的科研精神对我以后的深造学 习有重要的意义致谢从开始进入课题到论文的顺利完成首先要感谢施继惠老师，本课题在选题 及研究过程中得到施老师的悉心指导施老师多次询问研究进程，并为我指点迷 津，帮助我开拓研究思路，精心点拨、热忱鼓励同时，还要感谢实验组其他同学的大力支持和热心帮助，才使我的毕业设 计能较为顺利的完成。

在此我向你们表示最衷心的感谢！最后，感谢所有关心我、帮助过我的老师、同学和朋友！（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）。